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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 有人遇到过酵母表达蛋白出现包涵体的现象吗？
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gongxj03

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人遇到过酵母表达蛋白出现包涵体的现象吗？ 已有1人参与

用毕赤酵母表达一个高等生物的糖蛋白，重复了10来次，换过几个菌株，但是一直没有检测到酶活，
上清跑电泳也没有检测到蛋白。怀疑是形成了包涵体，有人遇到过这种情况吗？
请问如何分离包涵体？
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1楼 2017-08-03 14:05:57
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果没有检测到蛋白说明蛋白没有表达，如果是包涵体一定能检测到
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2楼2017-08-03 23:57:07
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gongxj03

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-03 23:57:07
如果没有检测到蛋白说明蛋白没有表达，如果是包涵体一定能检测到

意思是说如果有蛋白，形成了包涵体，在上清液中也是可以检测到的？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-08-04 13:23:34
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongxj03 at 2017-08-04 13:23:34
意思是说如果有蛋白，形成了包涵体，在上清液中也是可以检测到的？
...

包涵体在上请中没有，只在沉淀中有，你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀？
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4楼2017-08-05 00:04:05
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-05 00:04:05
包涵体在上请中没有，只在沉淀中有，你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀？...

也有可能是没分泌出来，

另，也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录！
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5楼2017-08-05 10:20:38
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-05 10:20:38
也有可能是没分泌出来，

另，也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录！...

如果没有加分泌肽应该不会分泌出来
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6楼2017-08-05 12:48:33
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gongxj03

新虫 (初入文坛)
上清中没有，沉淀用液氮研磨后有蛋白，但是不确定是不是包涵体蛋白，担心是酵母自身的的蛋白。
请问有什么办法分离酵母包涵体吗？
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7楼2017-08-08 11:27:31
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