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gongxj03

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人遇到过酵母表达蛋白出现包涵体的现象吗? 已有1人参与

用毕赤酵母表达一个高等生物的糖蛋白,重复了10来次,换过几个菌株,但是一直没有检测到酶活,
上清跑电泳也没有检测到蛋白。怀疑是形成了包涵体,有人遇到过这种情况吗?
请问如何分离包涵体?
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果没有检测到蛋白说明蛋白没有表达,如果是包涵体一定能检测到
2楼2017-08-03 23:57:07
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gongxj03

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-03 23:57:07
如果没有检测到蛋白说明蛋白没有表达,如果是包涵体一定能检测到

意思是说如果有蛋白,形成了包涵体,在上清液中也是可以检测到的?

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-08-04 13:23:34
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gongxj03 at 2017-08-04 13:23:34
意思是说如果有蛋白,形成了包涵体,在上清液中也是可以检测到的?
...

包涵体在上请中没有,只在沉淀中有,你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀?
4楼2017-08-05 00:04:05
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-05 00:04:05
包涵体在上请中没有,只在沉淀中有,你SDS-PAGE的时候没有跑沉淀?...

也有可能是没分泌出来,

另,也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录!
5楼2017-08-05 10:20:38
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-05 10:20:38
也有可能是没分泌出来,

另,也要从RNA水平上检测目的基因是否有转录!...

如果没有加分泌肽应该不会分泌出来
6楼2017-08-05 12:48:33
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gongxj03

新虫 (初入文坛)

上清中没有,沉淀用液氮研磨后有蛋白,但是不确定是不是包涵体蛋白,担心是酵母自身的的蛋白。
请问有什么办法分离酵母包涵体吗?
7楼2017-08-08 11:27:31
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