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gongrui

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by 化蝶为谁舞 at 2017-08-08 08:42:47
老哥,用了同源重组。。板子上一个菌不长
...

先确定感受态是没问题的,再连接不要过夜,试试。

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11楼2017-08-08 08:45:45
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-08-06 17:39:01
板子上一个不长,无非是3个原因:

1.载体没构好:调节载体和片段的比例,确认T4连接酶有活性。
2. 感受态不行,自己做的感受态效率比商品的低太多,还是买商品的吧,我之前就是在这步上想省,结果浪费好多时间。 ...

抗性再三确认没错,然后感受态的问题,老师不让买,说这是最基础的实验要自己做,然后片段和载体的比例各种都试过了,酶也换了两三个公司的

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12楼2017-08-08 08:46:01
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by gongrui at 2017-08-08 08:45:45
先确定感受态是没问题的,再连接不要过夜,试试。
...

嗯,用的promega的T4酶,之前一直过夜连的

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13楼2017-08-08 08:46:58
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by zyfskj at 2017-08-02 16:56:00
首先呢,一个转化子不长,你不妨先转个空载体进去看看你的感受态长不长的出来,从而确认感受态有没有问题,再就是你的抗性标记没搞错吧。

曾经转过质粒,板子上能长

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14楼2017-08-08 08:47:46
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gongrui

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11楼: Originally posted by gongrui at 2017-08-08 08:45:45
先确定感受态是没问题的,再连接不要过夜,试试。
...

连接反应在pcr中进行,时间不要超过1小时。

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15楼2017-08-08 14:52:10
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