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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zyfskj at 2017-08-02 16:57:40
Takara有TA克隆试剂盒
...

好的,多谢

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11楼2017-08-04 20:46:12
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-02 16:03:39
我是直接未纯化的pcr产物补加taq酶体系 72℃半个小时

好的,多谢

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12楼2017-08-04 20:46:57
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-02 16:03:39
我是直接未纯化的pcr产物补加taq酶体系 72℃半个小时

我按照你的方法拿回收产物做的,可是原来4000bp变成了500bp,你有遇到过这种情况么?
13楼2017-08-08 18:38:12
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六维空想

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-08 18:38:12
我按照你的方法拿回收产物做的,可是原来4000bp变成了500bp,你有遇到过这种情况么?...

没有遇到过,你是pcr之后胶回收然后加a的么  确定p出了目的条带么

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14楼2017-08-08 21:31:14
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-08 21:31:14
没有遇到过,你是pcr之后胶回收然后加a的么  确定p出了目的条带么
...

目的条带当然有啊,回收产物单独跑胶条带就在目的大小很清晰且单一

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15楼2017-08-09 08:37:16
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六维空想

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-09 08:37:16
目的条带当然有啊,回收产物单独跑胶条带就在目的大小很清晰且单一
...

后面加a只需要taq酶  pcr产物  buffer   dntp  应该不会改变它的长度吧   你再试试,要不也可以用平末端克隆载体   就不需要加a了

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16楼2017-08-09 09:09:50
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-09 09:09:50
后面加a只需要taq酶  pcr产物  buffer   dntp  应该不会改变它的长度吧   你再试试,要不也可以用平末端克隆载体   就不需要加a了
...

我就是按照你这组分加的,没有问题呀。那是程序的问题么?我是使用的72°C  30min,请问你做的是一样吗
17楼2017-08-09 13:52:45
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六维空想

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-09 13:52:45
我就是按照你这组分加的,没有问题呀。那是程序的问题么?我是使用的72°C  30min,请问你做的是一样吗...

我也是这样的

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18楼2017-08-09 15:24:11
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吧啦double

新虫 (初入文坛)

您好,想问问反向pcr的步骤是什么啊?怎么找酶切位点?还有引物的设计要求是啥?我刚接触,没找到相关方法,能提供一下么

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19楼2018-03-01 15:21:48
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吧啦double

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 吧啦double at 2018-03-01 15:21:48
您好,想问问反向pcr的步骤是什么啊?怎么找酶切位点?还有引物的设计要求是啥?我刚接触,没找到相关方法,能提供一下么

抱歉,表情不知道怎么回事

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20楼2018-03-01 15:22:16
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