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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反向PCR 测序失败
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by zyfskj at 2017-08-02 16:57:40
Takara有TA克隆试剂盒
...

好的，多谢

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11楼2017-08-04 20:46:12
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-02 16:03:39
我是直接未纯化的pcr产物补加taq酶体系 72℃半个小时

好的，多谢

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12楼2017-08-04 20:46:57
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-02 16:03:39
我是直接未纯化的pcr产物补加taq酶体系 72℃半个小时

我按照你的方法拿回收产物做的，可是原来4000bp变成了500bp，你有遇到过这种情况么？
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13楼2017-08-08 18:38:12
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六维空想

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13楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-08 18:38:12
我按照你的方法拿回收产物做的，可是原来4000bp变成了500bp，你有遇到过这种情况么？...

没有遇到过，你是pcr之后胶回收然后加a的么  确定p出了目的条带么

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14楼2017-08-08 21:31:14
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-08 21:31:14
没有遇到过，你是pcr之后胶回收然后加a的么  确定p出了目的条带么
...

目的条带当然有啊，回收产物单独跑胶条带就在目的大小很清晰且单一

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15楼2017-08-09 08:37:16
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六维空想

新虫 (小有名气)
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15楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-09 08:37:16
目的条带当然有啊，回收产物单独跑胶条带就在目的大小很清晰且单一
...

后面加a只需要taq酶  pcr产物  buffer   dntp  应该不会改变它的长度吧   你再试试，要不也可以用平末端克隆载体   就不需要加a了

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16楼2017-08-09 09:09:50
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Melody灬绝仙

新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-08-09 09:09:50
后面加a只需要taq酶  pcr产物  buffer   dntp  应该不会改变它的长度吧   你再试试，要不也可以用平末端克隆载体   就不需要加a了
...

我就是按照你这组分加的，没有问题呀。那是程序的问题么？我是使用的72°C  30min，请问你做的是一样吗
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17楼2017-08-09 13:52:45
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六维空想

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17楼: Originally posted by Melody灬绝仙 at 2017-08-09 13:52:45
我就是按照你这组分加的，没有问题呀。那是程序的问题么？我是使用的72°C  30min，请问你做的是一样吗...

我也是这样的

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18楼2017-08-09 15:24:11
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吧啦double

新虫 (初入文坛)
您好，想问问反向pcr的步骤是什么啊？怎么找酶切位点？还有引物的设计要求是啥？我刚接触，没找到相关方法，能提供一下么

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19楼2018-03-01 15:21:48
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吧啦double

新虫 (初入文坛)
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19楼: Originally posted by 吧啦double at 2018-03-01 15:21:48
您好，想问问反向pcr的步骤是什么啊？怎么找酶切位点？还有引物的设计要求是啥？我刚接触，没找到相关方法，能提供一下么

抱歉，表情不知道怎么回事

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20楼2018-03-01 15:22:16
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