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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)

[求助] 用其他启动子替换puc18上的lac启动子 已有2人参与

如题,想用一个强启动子替换掉原本载体上的lac启动子,但没有合适的酶切位点怎么办。

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zhouxfd

木虫 (正式写手)

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可以用Gibson的方法将beckbone扩出来,之后在扩想要的启动子,最后同源重组链接,具体步骤请参考NEB网站

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2楼2017-08-01 13:02:51
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-01 13:02:51
可以用Gibson的方法将beckbone扩出来,之后在扩想要的启动子,最后同源重组链接,具体步骤请参考NEB网站

请问NEB上面有具体的同源连接的方法吗?

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3楼2017-08-01 21:26:36
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Leo郭浩 at 2017-08-01 21:26:36
请问NEB上面有具体的同源连接的方法吗?
...

有的
4楼2017-08-02 00:40:17
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
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2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-01 13:02:51
可以用Gibson的方法将beckbone扩出来,之后在扩想要的启动子,最后同源重组链接,具体步骤请参考NEB网站

你好  我想再请问一下,想要扩增不含原来lac启动子的载体骨架,要怎么做,是直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物?  还是,先把载体双酶切,弄成线性载体,再分别克隆lac启动子左右两侧片段,再连接?  新手, 请见谅

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5楼2017-08-03 18:46:28
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Leo郭浩 at 2017-08-03 18:46:28
你好  我想再请问一下,想要扩增不含原来lac启动子的载体骨架,要怎么做,是直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物?  还是,先把载体双酶切,弄成线性载体,再分别克隆lac启动子左右两侧片段,再连接?  新手 ...

直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物就可以了
6楼2017-08-03 23:52:58
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用pcr的方法p出来,然后连上就可以了
···
7楼2017-08-04 08:55:15
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