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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用其他启动子替换puc18上的lac启动子
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)

[求助] 用其他启动子替换puc18上的lac启动子 已有2人参与

如题，想用一个强启动子替换掉原本载体上的lac启动子，但没有合适的酶切位点怎么办。

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1楼 2017-08-01 11:52:31
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用Gibson的方法将beckbone扩出来，之后在扩想要的启动子，最后同源重组链接，具体步骤请参考NEB网站
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Leo郭浩
2楼2017-08-01 13:02:51
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-01 13:02:51
可以用Gibson的方法将beckbone扩出来，之后在扩想要的启动子，最后同源重组链接，具体步骤请参考NEB网站

请问NEB上面有具体的同源连接的方法吗？

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3楼2017-08-01 21:26:36
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Leo郭浩 at 2017-08-01 21:26:36
请问NEB上面有具体的同源连接的方法吗？
...

有的
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4楼2017-08-02 00:40:17
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Leo郭浩

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-01 13:02:51
可以用Gibson的方法将beckbone扩出来，之后在扩想要的启动子，最后同源重组链接，具体步骤请参考NEB网站

你好  我想再请问一下，想要扩增不含原来lac启动子的载体骨架，要怎么做，是直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物？  还是，先把载体双酶切，弄成线性载体，再分别克隆lac启动子左右两侧片段，再连接？  新手， 请见谅

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5楼2017-08-03 18:46:28
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Leo郭浩 at 2017-08-03 18:46:28
你好  我想再请问一下，想要扩增不含原来lac启动子的载体骨架，要怎么做，是直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物？  还是，先把载体双酶切，弄成线性载体，再分别克隆lac启动子左右两侧片段，再连接？  新手 ...

直接设计lac启动子左侧和右侧两侧序列的引物就可以了
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6楼2017-08-03 23:52:58
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用pcr的方法p出来，然后连上就可以了
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···
7楼2017-08-04 08:55:15
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