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龙眼桂圆

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR相关问题 已有7人参与

用设计好的引物（生物公司设计的）对模板DNA进行PCR扩增，扩增出的是只含目的基因的DNA 片段吗？？如果是这样，那是每个模板DNA 都会含有目的基因吗？？比如引物的目的基因是(ATATA)，那PCR时的模板DNA 里一定会有含（ATATA）的片段？？刚接触，很是想不通，求解答！！

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1楼 2017-07-29 19:39:07
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叫我扬子鳄

银虫 (小有名气)
★
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打个比方，你把模板理解成万里长城，那么你的目的基因就是其中20-30米的一个长度，而你设计的引物就是这20-30米长度中的一两块砖头。而PCR获得目的基因的过程你也可以理解为以这一两块砖头为起始终止点，以原长城为模板，将这20-30米的长城复原，也就是得到了你的目的基因片段。
另外你说的扩增出的是否只含目的基因的DNA 片段，理论上来讲是的。但是如果你引物特异性低，错配高等原因，就会出现期待意外的片段，也就是琼脂糖凝胶电泳里出现的杂带。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小菜刀
7楼2017-08-02 18:30:20
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普通回帖

龙眼桂圆

新虫 (初入文坛)
求解答

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2楼2017-07-29 21:44:40
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糖宝小水

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-01 07:45:58
扩增出的肯定含有目的片段，但是不是只含有目的基因的片段，要看设计的引物，另外模板是dna双链，肯定要含有目的基因片段

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3楼2017-07-31 22:53:25
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焦毅

新虫 (初入文坛)
★
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引物是针对模板上的目的基因序列特殊设计的，PCR的时候肯定扩增的是模板上的目的基因呀。是因为模板上有（ATATA）所以引物的目的基因设计的有（ATATA），而不是说引物的目的基因是（ATATA），所以模板一定含有（ATATA）。虽然说的不太严谨，不过因和果大概是这样的。
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4楼2017-08-02 10:19:03
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龙眼桂圆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 焦毅 at 2017-08-02 10:19:03
引物是针对模板上的目的基因序列特殊设计的，PCR的时候肯定扩增的是模板上的目的基因呀。是因为模板上有（ATATA）所以引物的目的基因设计的有（ATATA），而不是说引物的目的基因是（ATATA），所以模板一定含有（ATA ...

了解了！！谢谢～

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5楼2017-08-02 17:19:02
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龙眼桂圆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 糖宝小水 at 2017-07-31 22:53:25
扩增出的肯定含有目的片段，但是不是只含有目的基因的片段，要看设计的引物，另外模板是dna双链，肯定要含有目的基因片段

谢谢解答～

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6楼2017-08-02 17:19:31
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vmp651312

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 叫我扬子鳄 at 2017-08-02 18:30:20
打个比方，你把模板理解成万里长城，那么你的目的基因就是其中20-30米的一个长度，而你设计的引物就是这20-30米长度中的一两块砖头。而PCR获得目的基因的过程你也可以理解为以这一两块砖头为起始终止点，以原长城为 ...

就服长城
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8楼2017-08-05 08:36:29
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
表述的   好乱

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9楼2017-08-05 09:21:52
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小菜刀

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 叫我扬子鳄 at 2017-08-02 18:30:20
打个比方，你把模板理解成万里长城，那么你的目的基因就是其中20-30米的一个长度，而你设计的引物就是这20-30米长度中的一两块砖头。而PCR获得目的基因的过程你也可以理解为以这一两块砖头为起始终止点，以原长城为 ...

引物特异性低咋理解呀，还有我以为杂带是两个条带的DNA有交叉？

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10楼2017-08-05 09:57:39
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