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过氧化氢酶的活性测定 已有1人参与
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| 我正在做水稻被病菌侵染后的酶活性变化的测定，今天测CAT时，测得对照（加入失活酶液）的吸光度小于样品（加入酶液）的吸光度，请问这种情况是正常的吗？请求指点 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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永远的晴天: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-07-30 10:02:02
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只要步骤正确，处理顺利没有错误，观测到的现象就是结果，并没有对错之分，只需要自圆其说。 方法可以参考这个： Misako Kato, Seki Shimizu. Chlorophyll metabolism in higher plants. VII. Chlorophyll degradation in senescing tobacco leaves; phenolic-dependent peroxidative degradation. Canadian Journal of Botany, 1987, 65(4): 729-735, 10.1139/b87-097 Catalase activity was assayed by measuring the initial rate of disappearance of H202. Three millilitres of reaction mixture contained 0.1 M sodium phosphate buffer, pH 7.0, 2 mM H20,, and 0.1 mL enzyme extract. The decrease in H,O, was followed as a decline in optical density at 240 nm and activity was calculated using the extinction coefficient (40.0 mM" cm-' at 240 nm) for H,O, |
2楼2017-07-29 17:04:20
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您好，我现在采用的是之前在文献中所查到的方法 酶液提取：称取新鲜植物叶片0.1g，置于预冷的研钵中，加入0.2M磷酸缓冲液（pH7.8）浴研磨，定容至5ml,，4℃静止10min，取上清液4000转离心15min，取上清液置于-20度保存； 测定：取试管4支，其中2支为样品测定管，1支对照管（加入失活酶液），1支空白管（以磷酸缓冲液代替酶液），按1ml蒸馏水、1.5ml磷酸缓冲液、0.2ml酶液混匀。最后，逐管加入0.3ml 0.1mol/l的H2O2,每加完1管，立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测3次（用加磷酸缓冲液的空白管调零） 因为看见许多文献中的方法几乎都不同，已经试过了好几种了，所以想尽可能的坚持一种方法测到底 |
3楼2017-07-29 17:31:53
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