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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白诱导
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王木木2016

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导 已有2人参与

我诱导的蛋白，之前做实验是在包涵体中，这几天再做实验发现转移到上清液中了，请问大家是什么原因啊，上清中的目的蛋白可以用吗？

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1楼 2017-07-28 09:47:04
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科学小覃

木虫 (正式写手)
这么神奇，我想要的是可溶表达。能不能说说你是怎么做到的，
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生物科学
2楼2017-07-28 10:15:28
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-07-29 12:05:41
目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中
1）你应该是没有明白什么是包涵体,简单的说就是翻译的蛋白没有正确折叠而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.实际上就是很多个蛋白分子,这些蛋白并不是交联在一起的,用高浓度的尿素和盐酸胍可以使他们变性,解聚.
2）用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体?
包涵体是不溶于水的,比较总蛋白.沉淀,及上清中的诱导带就可以知道上清中有没有你想要的可溶蛋白了
3）电泳检测的话,可以用SDS-PAGE检测,在上样之前,需要用上样缓冲液处理样品,处理后,包涵体也就解聚了,每个蛋白分子与SDS结合,形成了可溶物.
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-28 10:41:24
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-28 10:41:24
目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中
1）你应该是没有明白什么是包涵体,简单的说就是翻译的蛋白没有正确折叠而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.实际上就是很多个蛋白分子,这些蛋白并不是交联在一起的,用高浓度的 ...

可是之前都是在沉淀中的啊，现在在上清中了，对蛋白没有影响吧？正常纯化就可以么

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4楼2017-07-28 13:05:47
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2017-07-28 10:15:28
这么神奇，我想要的是可溶表达。能不能说说你是怎么做到的，

我也不知道，什么都没改变

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5楼2017-07-28 13:08:20
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是原来超声没破碎完全
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6楼2017-07-28 16:42:21
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ULYSSEESWB at 2017-07-28 16:42:21
应该是原来超声没破碎完全

超声破碎多久比较合适啊

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7楼2017-07-28 17:41:05
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sss2172014

木虫 (小有名气)
和破碎方式没有关系。可以考虑一下表达条件是否完全一致。不同条件会不同。

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8楼2017-07-30 17:39:22
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