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忽悠小混混

新虫 (初入文坛)

[交流] 引物怎么设 已有1人参与

哪位大神教教我，怎么设PCR引物？？？拜托拜托

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1楼 2017-07-27 19:43:43
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晋鹏

版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,PCR引物通常是一对,引物1和引物2.由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上,所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部（就是末尾是3'端的那一边）结合,为那些脱氧核苷酸提供3'的末端,就相当于开了个头.然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链.而那段引物就成了新链的一部分.
其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程,只是引物是人体自身合成的
引物设计原则
* 序列选取应在基因的保守区段
* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构
* 典型的引物18到24个核苷长.引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性.但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性.较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量.
* Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高）,GC含量在40%－60%
* 引物之间的TM相差避免超过2℃
* 引物的3’端避免使用碱基A,引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基
* 为避免的扩增,引物设计最好能跨两个外显子.
* Taqman探针技术要求片段长度在50bp－150bp
* 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C.
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-28 00:04:55
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忽悠小混混

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-28 00:04:55
PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,PCR引物通常是一对,引物1和引物2.由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核 ...

谢谢你

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3楼2018-07-07 23:52:56
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