应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 毕赤酵母表达兔源糖蛋白求助
151/2返回列表12下一页
查看: 1595  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gongxj03

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达兔源糖蛋白求助

请有相关经验和知识的高手支招，

最近在表达兔源糖蛋白，用pPICZaA载体，转化了X33/KM71/SMD1168三个菌株，均产生大量阳性转化子，

但是SDS-PAGE检测蛋白含量和酶活测定结果显示蛋白分泌量少，酶活极低，请问各位有什么办法解决吗？

急求，谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-07-25 16:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dellxiong

金虫 (初入文坛)
有做过抗生素筛选高拷贝菌株吗，（另，糖蛋白 需要糖基化修饰吗）
赞一下 回复此楼
2楼2017-08-05 10:25:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HZAUAS

新虫 (小有名气)
可能目的蛋白被降解了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-08 11:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HZAUAS

新虫 (小有名气)
你测的是上清液里面粗蛋白的浓度，还是纯化出来的目的蛋白浓度；酶活是怎么测的，方法描述一下才可能给你提点建议

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-08 12:05:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongxj03

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by HZAUAS at 2017-08-08 12:05:48
你测的是上清液里面粗蛋白的浓度，还是纯化出来的目的蛋白浓度；酶活是怎么测的，方法描述一下才可能给你提点建议

测的是上清液中的粗蛋白，用G250定量，上清中蛋白很少。酶活测定是加50ug底物，Tris-HCl（pH9.0，50mM),如果有酶活，底物被降解会产生黄色生成物，测OD。目测即可判断是否有活性，目前表达的菌株上清中都没有检测到酶活，
怀疑是产生了包涵体，想分离下酵母包涵体，请问有什么好办法吗？
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-08 13:01:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongxj03

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-05 10:25:26
有做过抗生素筛选高拷贝菌株吗，（另，糖蛋白 需要糖基化修饰吗）

加过抗生素筛选，但没有提高抗生素浓度，用的是常规浓度。
目前筛选到的菌株PCR鉴定都是阳性
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-08 13:02:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)
序列没优化吧

发自小木虫Android客户端
回复此楼
自信源于一次次成功的积累
7楼2017-08-08 13:21:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongxj03

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by luckydog52 at 2017-08-08 13:21:13
序列没优化吧

优化过了
回复此楼
8楼2017-08-08 13:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)
我们可以做优化的，也可以帮你表达纯化蛋白

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-08-08 14:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongxj03

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by star013 at 2017-08-08 14:33:27
我们可以做优化的，也可以帮你表达纯化蛋白

免费？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
10楼2017-08-08 14:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gongxj03 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 帮忙看看fileCode +5 wwncly 2026-08-10 9/450 2026-08-11 08:10 by li9527
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +4 Tide man 2026-08-10 4/200 2026-08-11 07:45 by emeraldine
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭