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迷茫的小象

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增 已有2人参与

用DNA扩增的片段长度正确，可测序序列不对，引物和模板都没有问题，哪位大神能指导指导啊

发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-07-25 15:07:05
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板时基因组DNA还是质粒？若是基因组DNA的话要考虑引物的特异性。若是质粒的话要考虑是否被污染，建议重新转化一下挑克隆测序。
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2017-07-25 15:47:10
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
步骤：
1，打开NCBI主页www.ncbi.nlm.nih.gov，左边search里面选择GENE 右边的对话框for里输入你想要的基因名称(NM_001101。
2，在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，Homo sapiens是人，选择第一个。
3，再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择FASTA。
4，显示的是他的基因序列，点击Download选择FASTA下载。
5，打开NCBI的Blast界面，选择Basic   Blast里的nucleotide blast。
6，添加已下载核酸序列，Database里选择Human，再点击最下面的Blast。
7，Blast对比结果。
8，在比对结果中选择前十个序列，下载到本地电脑中 。
9，下载的十个序列结合原有的待测序列，加载到ClustalX软件进行多重序列比对  。输出格式选择CLASTAL和PIR。进行完全对比。
10，对比结果。生成的dnd文件。生成的aln文件。
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-25 16:58:32
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