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茉绿萝ll

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 大鼠肝微粒体实验问题求助。谢谢大家不吝赐教哦！

请问哪位同学做过大鼠肝微粒体实验，有问题请教：

  1. 肝微粒体制备中，大鼠怎么处死，可以麻醉吗？会对后续代谢实验有影响吗？断头怎么做呢，不敢下手啊！肝脏必须要灌流吗？

2. 缓冲液在文献中用的各不相同，Tris-HCl缓冲液，0.25mol/L蔗糖溶液还有PBS各种，那种更常用呢？
10 mmol Tris    1.2114g
250 mmol 蔗糖 85.572g
1 mmol EDTA    0.37224g
盐酸（ HCl）调节 pH 为 7.4 我用这个配方的缓冲液匀浆，重悬微粒体可以吗？

3. 冻存微粒体要加20%甘油吗？那最后用的时候是直接用吗？甘油没有影响？

因为从来没有接触过这个实验，完全不懂。有哪位好心的同学熟悉这类实验呢，能不能留个联系方式，私信也行。所里也没有人做过，请各位大神不吝赐教！谢谢啦