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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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[求助] His标签蛋白纯化后做抗原要怎么处理？已有1人参与

表达His标签蛋白做抗原。蛋白用Ni柱纯化后，产物中的咪唑怎么除去，打动物前怎么处理？

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1楼 2017-07-17 15:46:40

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晋鹏

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-17 23:20:06
jurkat.1640: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2017-07-17 23:41:38

1，破细胞，高速离心收上清收集上清（同时平衡好柱子）；
2，既然你是His-tag，用Ni-NTA之类的柱子，两次上柱，buffer平衡；
3，低浓度咪唑（5mM）洗5-10柱体积，以洗去杂蛋白；
4，过梯度咪唑（10-500MM），用紫外检测仪监测280nm，收下每个峰；
5，用峰液跑SDS-PAGE，看哪个峰的蛋白浓度和纯度最为理想；
6，脱咪唑以及换buffer、脱盐，有两种基本方法：A，透析（经济、简便）；B，用脱盐柱（需要有仪器及柱子，更简便更省时）。