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jurkat.1640至尊木虫 (文坛精英)
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His标签蛋白纯化后做抗原要怎么处理？已有1人参与
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| 表达His标签蛋白做抗原。蛋白用Ni柱纯化后，产物中的咪唑怎么除去，打动物前怎么处理？ |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-17 23:20:06
jurkat.1640: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2017-07-17 23:41:38
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1，破细胞，高速离心收上清收集上清（同时平衡好柱子）； 2，既然你是His-tag，用Ni-NTA之类的柱子，两次上柱，buffer平衡； 3，低浓度咪唑（5mM）洗5-10柱体积，以洗去杂蛋白； 4，过梯度咪唑（10-500MM），用紫外检测仪监测280nm，收下每个峰； 5，用峰液跑SDS-PAGE，看哪个峰的蛋白浓度和纯度最为理想； 6，脱咪唑以及换buffer、脱盐，有两种基本方法：A，透析（经济、简便）；B，用脱盐柱（需要有仪器及柱子，更简便更省时）。 |
2楼2017-07-17 23:19:48
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3楼2017-08-17 15:48:21
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4楼2017-08-19 03:54:09