24小时热门版块排行榜

返回列表

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

MolEPI: 1
应助: 905 (博后)
金币: 16572.2
散金: 1654
红花: 120
沙发: 41
帖子: 14468
在线: 2172.3小时
虫号: 514340
注册: 2008-02-28
性别: GG
专业: 病毒学

[求助] His标签蛋白纯化后做抗原要怎么处理？已有1人参与

表达His标签蛋白做抗原。蛋白用Ni柱纯化后，产物中的咪唑怎么除去，打动物前怎么处理？

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2017-07-17 15:46:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

MolEPI: 6
应助: 626 (博士)
贵宾: 0.096
金币: 27590.2
散金: 1052
红花: 288
沙发: 2
帖子: 5663
在线: 726.4小时
虫号: 1183978
注册: 2011-01-05
性别: GG
专业: 生物信息学
管辖: 农林

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-17 23:20:06
jurkat.1640: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2017-07-17 23:41:38

1，破细胞，高速离心收上清收集上清（同时平衡好柱子）；
2，既然你是His-tag，用Ni-NTA之类的柱子，两次上柱，buffer平衡；
3，低浓度咪唑（5mM）洗5-10柱体积，以洗去杂蛋白；
4，过梯度咪唑（10-500MM），用紫外检测仪监测280nm，收下每个峰；
5，用峰液跑SDS-PAGE，看哪个峰的蛋白浓度和纯度最为理想；
6，脱咪唑以及换buffer、脱盐，有两种基本方法：A，透析（经济、简便）；B，用脱盐柱（需要有仪器及柱子，更简便更省时）。