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jxWire新虫 (初入文坛)
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[交流]
枯草芽胞杆菌的转化表达相关问题
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本人最近在做枯草的转化表达实验，用的穿梭载体，遇到很多问题，希望大家有这方面实验经验的可以指导我，帮我解决下问题，谢谢大家 实验中遇到的问题是这样的： 1.重组质粒构建成功了 在大肠中复制是没有问题的 提出的质粒酶切 测序鉴定结果都对，但是转化进枯草以后 一方面提不出质粒 另一方面菌落PCR测序的结果跟我的目的片段不一致 这个是连接出的问题还是菌的问题或者是其他的呢 2.还有提质粒的问题 用的TAKARA家的革兰式阳性小提试剂盒 但是发现阴性对照的空菌也能提出一个条带 （分子量在10000+） 并且转化完的菌提不出我的重组质粒 想知道这个是我转化的原因 还是试剂盒的原因呢 大家在做这个实验的时候有遇到过这种问题吗 如果是试剂盒的原因的话 可以推荐我几个好用的牌子吗 如果是转化的原因的话 转化过程有什么要注意的吗 本人使用的最常用的SP和GM转化法 3.之前看到有其他朋友提到过枯草很容易产生假阳性 这个要怎么去判断呢 有什么培养的技巧吗 暂时就这些问题 希望大家可以帮我分析分析 如果有朋友是做这个方面的 有其他经验也可以在这里详细交流一下，谢谢大家了 |
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