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386TLJ

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[求助] 蛋白样品较浑浊，选用什么方法或者试剂盒测量蛋白含量比较准确已有2人参与

蛋白样品较浑浊，选用什么方法或者试剂盒测量蛋白含量比较准确，请大家多多指教，谢谢

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1楼 2017-07-15 15:05:36

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晋鹏

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
386TLJ: 金币+15, ★★★很有帮助 2017-07-24 14:28:17

1、定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.

2、凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2％费时
10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
3、双缩脲法（Biuret法）灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
4、紫外吸收法较为灵敏 50～100mg 快速 10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；
5、Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高 5mg 慢速 40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；
各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
6、考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；
SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

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386TLJ

及时行乐，人生不留遗憾！

2楼2017-07-15 15:36:50

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-15 15:36:50
1、定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.

2、凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2％费时
10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非 ...

谢谢

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3楼2017-07-15 17:43:47

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