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测铜绿微囊藻蛋白质和抗氧化酶破碎方法 已有1人参与
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破碎方法有冻融破碎，超声破碎，不想用研磨，太耗时间了，请问用哪种比较好？然后具体参数是什么？ 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-15 23:32:24
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-15 23:32:24
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用超声破碎 参考实验方案： 试验生物材料 铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa FACHB-905), 属于蓝藻门(Cyanophyta)色球藻目(Chroococcales)微囊藻属(Microcystis), 单细胞形态, 购于中国科学院水生生物研究所。单种培养于光照培养箱, 温度(25±0.5), ℃光暗比12L︰2D, 光照强度为2000 lx, 培养基为BG-11培养液。实验采用对数生长期的藻细胞, 密度约为2×107个/mL, 实验开始时用BG-11培养基将微囊藻悬浮液稀释至起始浓度约为2.45×104个/ mL。 实验方案 实验用超声波细胞破碎仪由超声装置(JYD-650L，上海之信仪器有限公司)通过一个圆柱形探头发射出, 探头半径15mm 。每组实验, 200 mL藻液装入500 mL烧杯中, 超声探头用酒精棉反复擦拭消毒后插入藻液液面下1 cm辐射20min。在超声辐射后, 将藻液装入250 mL锥形瓶中, 并培养于光照培养箱, 以此作为超声组(Ug)。以不做超声处理的藻液作为对照组(Cg), 培养于相同条件下。实验所用玻璃器皿均高压灭菌后烘干备用, 并在无菌状态下操作实验。 藻细胞超微结构的观察 分别收集超声组和对照组培养1、3、5d的藻细胞, 用4% 戊二醛及1% 锇酸各固定2h, 之后再用各级浓度(30%、50%、70%、80%、90%、100%)丙酮脱水, 每级15min。脱水后的样品用Epon815 树脂在60℃包埋2h。包埋块用超薄切片机切片（100um够薄的话，可以用振动切片机，不需要进行前期处理包埋，可以直接切片染色）, 切片经醋酸双氧铀-柠檬酸铅双染色后, 用透射电镜(JEM-1200EX, JEOL, Japan)观察并拍照。 |
盛鸿
2楼2017-07-15 13:24:02
西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2017-07-15 23:32:10
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本帖内容被屏蔽 |
3楼2017-07-15 13:25:20
4楼2017-07-15 13:36:10
5楼2017-07-15 15:47:48