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fairyzhen

铜虫 (初入文坛)

[求助] 你好，我用天根试剂盒提细菌total RNA，同一批提取的R... 已有3人参与

你好，我用天根试剂盒提细菌total RNA，同一批提取的RNA跑电泳总有一些降解的，要怎么办呢？有一些提出来的有两条带，没有5s RNA ，为什么 @天使托

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1楼 2017-07-12 21:18:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

萌萌蜕变

新虫 (小有名气)
RNA降解是比较正常的情况，因为空气中会有RNA酶，只能通过操作尽量减少降解一般避免不了。高品质的RNA一般没有5s的条带，而且28s/18s亮度比为2:1左右是比较好的样品，一般这个程度可以继续下步实验。

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2楼2017-07-12 21:25:15
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fairyzhen

铜虫 (初入文坛)
谢谢你的回复，我后续要做转录组，对RIN要求高，三条带不才是完整的高品质的RNA吗 @天使托

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3楼2017-07-13 21:51:31
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普通回帖

傲娇小丫头

新虫 (小有名气)
要做转录组测序，你可以直接送样本到公司，公司提取，这样好一些啊。

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一万年太久，只争朝夕。。。。。
4楼2017-07-24 00:39:12
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傲娇小丫头

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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4楼: Originally posted by 傲娇小丫头 at 2017-07-24 00:39:12
要做转录组测序，你可以直接送样本到公司，公司提取，这样好一些啊。

转录组测序要求的RNA质量会很高，基本上自己提取很难达到要求，你可以直接送样，公司提取如何让公司反馈提取结果。

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一万年太久，只争朝夕。。。。。
5楼2017-07-24 00:40:45
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fairyzhen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 傲娇小丫头 at 2017-07-24 00:40:45
转录组测序要求的RNA质量会很高，基本上自己提取很难达到要求，你可以直接送样，公司提取如何让公司反馈提取结果。
...

之前是因为公司提的rna量总是不够，所以自己尝试提取

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6楼2017-07-25 16:32:50
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wu188ming

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好，您可以考虑使用北京百泰克的TRIpure总RNA提取试剂（TRIZOL），我提的还可以，降解没有那么严重。详情可私聊。
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7楼2017-09-08 10:20:36
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

我用qiagen的也试过，有时候就是RNA含量低，这个正常。你可以注意如下几点：用RNAase清除剂，喷洒操作台。用细菌RNAase抑制剂加入到提好的RNA样品减缓降解。第一步裂解时加入的裂解液稍微多一点，时间久一点。无菌操作，带口罩帽子，避免管口对着超净台外侧。小心每一步操作，DNAase1那步尽可能快！
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8楼2017-09-08 13:47:03
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fenggeshj

新虫 (小有名气)
你用的是DP405吗？如果是用于高通量测序的实验，最好还是用DP424，这款提取的产物量会大很多。
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9楼2018-01-03 13:19:32
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回首萧瑟123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-08 13:47:03
我用qiagen的也试过，有时候就是RNA含量低，这个正常。你可以注意如下几点：用RNAase清除剂，喷洒操作台。用细菌RNAase抑制剂加入到提好的RNA样品减缓降解。第一步裂解时加入的裂解液稍微多一点，时间久一点。无菌操 ...

可以不加dna酶吗

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10楼2019-10-18 23:46:30
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