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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌扫描电镜制作的样品能不能用来测FTIR和XRD
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食指之

木虫 (著名写手)
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细菌扫描电镜制作的样品能不能用来测FTIR和XRD
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如题，求助各位大神，我做的是细菌处理重金属，按以下步骤制备扫描电镜样品： 2.5%戊二醛固定 4 h→磷酸缓冲液洗涤 3 次→乙醇梯度脱水（分别为 30%、50%、70%、85%、90%乙醇各 1 次，100%乙醇 2 次，15 min/次）→
乙酸异戊酯置换乙醇 2 次（20 min/次），每一步完成后经 8000 r/min 离心 5 min。将样品分别在 20℃、40℃和80℃冷冻 12 h，于冷冻干燥仪中干燥 12 h，备用。
想知道这样处理后的样品还能不能继续做红外光谱和xrd，还是需要重新制备样品?

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1楼 2017-07-12 14:33:34
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食指之

木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 懒懒呢 at 2017-07-19 11:03:21
楼主 这个制作电镜标本的步骤是在哪里找到的？冲洗和乙醇脱水的具体步骤能否告知？谢谢！！

这方法是在这上面其他大神那里找的，梯度乙醇脱水就是用不同浓度乙醇依次脱水，每次15min左右，我加的乙醇量是初始菌液体积的一半，做出来的图的效果还不错，

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18楼2017-07-21 09:48:27
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
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你这个是TEM的程序，不是SEM吧。SEM的程序其实不需要这么复杂，原则就是处理时间约少约好，当然需要看你的样品特征，以前我是做地质微生物的，需要把微生物和无机矿物放一起固定，如果你用乙醇脱水，保证啥都看不见。最后只能用PBS洗涤完，乙酸乙酯脱水一次，直接风干，不能冷干，因为固定用的是2.5%戊二醛，固定时间其实需要很长的，我固定了24小时都不行，不够硬。最后看文献用了0.25的戊二醛预固定几个小时再用2.5的固，稍微好一点。固定后的样品由于细菌和界面结合力通常是氢键，乙醇脱水氢键很容易就断了，洗脱完菌也没有了，只能自然风干。效果很好！
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20楼2017-09-15 11:04:09
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懒懒呢

金虫 (著名写手)
★
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楼主 这个制作电镜标本的步骤是在哪里找到的？冲洗和乙醇脱水的具体步骤能否告知？谢谢！！
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17楼2017-07-19 11:03:21
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用户名太难起

新虫 (初入文坛)
★
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楼主你好，请问你知道答案了吗，样品可以继续用吗
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19楼2017-09-15 09:45:54
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食指之

木虫 (著名写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-15 11:04:09
你这个是TEM的程序，不是SEM吧。SEM的程序其实不需要这么复杂，原则就是处理时间约少约好，当然需要看你的样品特征，以前我是做地质微生物的，需要把微生物和无机矿物放一起固定，如果你用乙醇脱水，保证啥都看不见 ...

可能我这个偏向纯细菌，酒精脱水后效果还不错，但是细菌表面富集的重金属并不多，可能与您说的这个原因有关，我下次做实验注意一下，

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21楼2017-09-15 15:00:42
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食指之

木虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 用户名太难起 at 2017-09-15 09:45:54
楼主你好，请问你知道答案了吗，样品可以继续用吗

我感觉用是可以用，但是结果可能不是特别准确

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22楼2017-09-15 15:02:32
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
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引用回帖:
21楼: Originally posted by 食指之 at 2017-09-15 15:00:42
可能我这个偏向纯细菌，酒精脱水后效果还不错，但是细菌表面富集的重金属并不多，可能与您说的这个原因有关，我下次做实验注意一下，
...

纯的话应该不影响，如果想看表面富集金属次生EPS，可以考虑用乙酸乙酯脱水，避免酒精，然后可以试试不用戊二醛，用多聚甲醛试试，不过固定时间长一些

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23楼2017-09-15 19:42:43
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xhy86682楼
2017-07-12 14:33   回复  
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北京的春天3楼
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mjlsb4楼
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粘人二丫头5楼
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pandongzi6楼
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gh8310137楼
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cxy33118楼
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cjxhyh9楼
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天空控股10楼
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2013yefeng11楼
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努力跑小姐12楼
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saralook13楼
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蒹葭往事14楼
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心有所念15楼
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oneblock16楼
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