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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 凝胶层析方面的问题 求助完成
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dlhj305799

铜虫 (小有名气)

[交流] 凝胶层析方面的问题 求助完成

多肽混合物经过凝胶层析分离后得到的几个峰，每个峰不一定就是一种肽吧？我的意思就是分子量相同但是如果等电点不同的多肽是不是不能够通过这种方法分开？

[ Last edited by dlhj305799 on 2009-1-30 at 21:45 ]
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1楼 2009-01-24 17:03:24
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
dlhj305799(金币+1):thanks 1-30 21:44
不但分子量相同但是如果等电点不同的多肽不能分开,而且分子量差异较小的多肽也不能分开,分离多肽还是用RPC好一点
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2楼2009-01-24 17:42:15
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
dlhj305799(金币+1):thanks 1-30 21:45
如果你的多肽分子量和别的组分差别不是太大，那么就不要指望通过分子筛能完全分开。分子筛特别是自己装的效果不是很好的话，出来一个峰里面可以有多种蛋白。最好看看你的多肽还有没有其他特别性质，用其他柱层析系统做进一步分离，如果有条件最好用免疫亲和层析，那种系统效率很高。
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3楼2009-01-24 20:35:02
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gaojingjing

木虫 (正式写手)
一般来讲，分子量相差50%以上才有可能用分子筛层析分开，与等电点完全无关。影响分子筛层析分离效果的因素：1）分子量的差异，至少相差50%以上；2）分子筛填料的种类，目的蛋白的分子量范围最好位于填料分离范围的中间，这样分离效果最好；3）装柱效果，装柱后应测柱效，每米理论塔板数越大越好，好的分子筛填料可以达到10000以上，例如GE公司Superdex；4）缓冲液，最低含0.15M氯化钠，以消除可能的蛋白分子与填料之间的静电吸附作用。缓冲液的pH只是对蛋白的溶解度可能有影响，对分离效果无影响。
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4楼2009-01-26 10:01:41
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
分子量差不多，就不好分出来了。把峰接出来。然后冻干，再电泳分离。
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5楼2009-01-28 10:56:38
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流浪的猪

金虫 (小有名气)
蛋白分离的话还是要电泳鉴定是否是纯组分
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6楼2009-01-28 15:45:51
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