10楼: Originally posted by 帅气CKH at 2017-07-11 20:23:28
谢谢各位的建议，小弟我今天居然做出菌落了！！！！！加起来有差不多20个呢，准备送测序看看连上没有，希望有个好结果把。
另外这次实验我基本上也是跟之前的步骤大同小异，连接条件差不多，照样用水复苏，唯一不同 ...

9楼: Originally posted by jerry110 at 2017-07-11 15:15:01
问题排查完后，再看一下设计的引物酶切位点，保护碱基等有木有都加好，载体有木有处理好，我这边的经验是T4链接2h，10uL体系转化100uL感受态细胞，载体：片段按1:5，22度链接，复苏用LB,楼主可以尝试一下，祝好！

13楼: Originally posted by 一只懒宝宝 at 2017-07-22 15:45:06
我也是连接不上，都连了大半个月了，用T4连接酶4℃过夜