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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] 电泳条带弥散 已有3人参与

pcr后跑电泳这个样子是因为什么？用的东西都是前一天刚刚p出来的东西，条件也没有变，不知道为什么就p不出来了，每次条带都是这个样子

电泳条带弥散


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1楼 2017-07-10 21:15:02
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Younger Li

新虫 (初入文坛)
模板浓度太高或者循环数过高

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2楼2017-07-10 23:04:29
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Younger Li at 2017-07-10 23:04:29
模板浓度太高或者循环数过高

之前用这个条件相同的p出来东西了，也要再调整一下嘛？

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3楼2017-07-11 07:20:37
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:22
1、可以把前面的实验也说说,这样更有助于解决问题.一般来说电泳弥散就是没有扩增出你想要的目的片段,这个跟很多因素有关系,可以换引物,可以改变pcr条件等等。

2、甚至凝胶制配不好、电压不稳都是有可能的。
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及时行乐，人生不留遗憾！
4楼2017-07-11 08:14:39
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:34
你的marker条带很清晰，绝对不是电泳的问题，问题出在PCR上。
最可能是模版浓度太高，因为你用的是前一天P出来的东西。做个浓度梯度试试。
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坚持！
5楼2017-07-11 09:26:22
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PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:51
marker 很好，首先排除制胶的问题，那问题就应该出在模板 酶浓度这两个主要问题，你再检查一下，你是不是酶浓度加高了，或者是模板？建议适当降低模板浓度试一下
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6楼2017-07-11 10:08:09
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by PattyGao at 2017-07-11 10:08:09
marker 很好，首先排除制胶的问题，那问题就应该出在模板 酶浓度这两个主要问题，你再检查一下，你是不是酶浓度加高了，或者是模板？建议适当降低模板浓度试一下

模版浓度也降低了，但是还是弥散的很严重，用胶回收产物当模版也依旧是弥散的条带，条件都是之前摸索好的，但是隔了一天用相同的条件，相同的dna，不管怎么p都是弥散的，而且后来也改了条件，比如减少循环数，提高退火温度，也都还是这个样子

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7楼2017-07-12 07:48:42
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PattyGao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-07-12 07:48:42
模版浓度也降低了，但是还是弥散的很严重，用胶回收产物当模版也依旧是弥散的条带，条件都是之前摸索好的，但是隔了一天用相同的条件，相同的dna，不管怎么p都是弥散的，而且后来也改了条件，比如减少循环数，提高 ...

酶浓度呢

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8楼2017-07-12 18:51:23
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by PattyGao at 2017-07-12 18:51:23
酶浓度呢
...

我想大概是引物的问题，我换了一个新的引物之后就做出来了

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9楼2017-07-12 18:57:27
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