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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] 电泳条带弥散 已有3人参与

pcr后跑电泳这个样子是因为什么?用的东西都是前一天刚刚p出来的东西,条件也没有变,不知道为什么就p不出来了,每次条带都是这个样子

电泳条带弥散


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Younger Li

新虫 (初入文坛)

2楼2017-07-10 23:04:29
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Younger Li at 2017-07-10 23:04:29
模板浓度太高或者循环数过高

之前用这个条件相同的p出来东西了,也要再调整一下嘛?

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3楼2017-07-11 07:20:37
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:22
1、可以把前面的实验也说说,这样更有助于解决问题.一般来说电泳弥散就是没有扩增出你想要的目的片段,这个跟很多因素有关系,可以换引物,可以改变pcr条件等等。

2、甚至凝胶制配不好、电压不稳都是有可能的。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-07-11 08:14:39
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:34
你的marker条带很清晰,绝对不是电泳的问题,问题出在PCR上。
最可能是模版浓度太高,因为你用的是前一天P出来的东西。做个浓度梯度试试。
坚持!
5楼2017-07-11 09:26:22
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PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:11:51
marker 很好,首先排除制胶的问题,那问题就应该出在模板 酶浓度这两个主要问题,你再检查一下,你是不是酶浓度加高了,或者是模板?建议适当降低模板浓度试一下
6楼2017-07-11 10:08:09
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by PattyGao at 2017-07-11 10:08:09
marker 很好,首先排除制胶的问题,那问题就应该出在模板 酶浓度这两个主要问题,你再检查一下,你是不是酶浓度加高了,或者是模板?建议适当降低模板浓度试一下

模版浓度也降低了,但是还是弥散的很严重,用胶回收产物当模版也依旧是弥散的条带,条件都是之前摸索好的,但是隔了一天用相同的条件,相同的dna,不管怎么p都是弥散的,而且后来也改了条件,比如减少循环数,提高退火温度,也都还是这个样子

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7楼2017-07-12 07:48:42
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PattyGao

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sheng_1210 at 2017-07-12 07:48:42
模版浓度也降低了,但是还是弥散的很严重,用胶回收产物当模版也依旧是弥散的条带,条件都是之前摸索好的,但是隔了一天用相同的条件,相同的dna,不管怎么p都是弥散的,而且后来也改了条件,比如减少循环数,提高 ...

酶浓度呢

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8楼2017-07-12 18:51:23
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by PattyGao at 2017-07-12 18:51:23
酶浓度呢
...

我想大概是引物的问题,我换了一个新的引物之后就做出来了

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9楼2017-07-12 18:57:27
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