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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

[求助] PCR测序 已有1人参与

PCR产物测序时只找到一条引物,比对后发现前半段是目的片段,后半段不是,这样的结果能用吗?
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demonhb

新虫 (小有名气)

多长的目的片段,确定测通了吗?

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2楼2017-07-09 09:41:56
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柳柳好

新虫 (初入文坛)

一条引物测的前半是目的基因,后半不是?如果是这样,应该能用

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3楼2017-07-09 11:13:37
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by demonhb at 2017-07-09 09:41:56
多长的目的片段,确定测通了吗?

1000左右的片段,有500bp左右是目的片段,后面五百比对后发现是别的

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4楼2017-07-10 01:16:38
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 柳柳好 at 2017-07-09 11:13:37
一条引物测的前半是目的基因,后半不是?如果是这样,应该能用

但序列不完整,是做3’的测序结果,后面大概还有二十几个碱基才能补足ORF框,师兄说这样不行要重新做,我有点不太容易接受,因为后续是要全场验证的,所以我就想先将比对后是目的片段的那段与之前做的5’和中间片段拼完,然后再全场验证一下就可以了,不知我想的是否有缺陷

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5楼2017-07-10 01:23:33
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by demonhb at 2017-07-09 09:41:56
多长的目的片段,确定测通了吗?

不太确定是否测通,送给英骏公司测序的,引物是M13,测了双向的,M13(-47),M13(-48)

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6楼2017-07-10 01:25:55
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demonhb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 洛神惟惟 at 2017-07-10 01:25:55
不太确定是否测通,送给英骏公司测序的,引物是M13,测了双向的,M13(-47),M13(-48)
...

那应该是测通了的,会不会是序列拼接的时候出问题的

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7楼2017-07-10 09:24:15
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柳柳好

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 洛神惟惟 at 2017-07-10 01:23:33
但序列不完整,是做3’的测序结果,后面大概还有二十几个碱基才能补足ORF框,师兄说这样不行要重新做,我有点不太容易接受,因为后续是要全场验证的,所以我就想先将比对后是目的片段的那段与之前做的5’和中间片段 ...

建议重新做

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8楼2017-07-10 11:07:45
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bbass533

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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9楼2017-07-10 11:35:51
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