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老师，想问一下，我已经测的了AGPase的吸光度值，怎么计算它的活性 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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1、AGP催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。 2、按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活性单位。 AGP（U/mgprot）＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷（V样×Cpr）÷T=2813×ΔA÷Cpr。此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。 按照样本鲜重计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。AGP活性（U/gmass）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷（W×V样÷V样总）÷T=2813×ΔA÷W V反总：反应体系总体积，7×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 mol/L/cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；d:比色皿光径1cm。Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g。T:反应时间2min。 |
2楼2017-07-13 19:33:18