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实验专栏丨大牛是这样做成骨细胞诱导实验的!
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实验专栏丨大牛是这样做成骨细胞诱导实验的! 一、实材料及试剂 培养板、酒精灯、移液枪、CO2培养箱、显微镜等MC3T3-E1(前成骨细 二、实验内容 试验方法:将MC3T3-E1(前成骨细胞)细胞接种于含MEM-α培养基(10%胎牛血清,1%青链霉素)的培养瓶内,放置于二氧化碳培养箱(37℃,5%CO2,潮湿)培养,每三天更换一次培养液,待细胞铺满瓶底的80%以上时,用胰蛋白酶消化,加入MEM-α培养基(10%胎牛血清,1%青链霉素),将细胞吹打下来并吸取到10 mL离心管中,离心,弃上清,注意不要碰到管口,加入MEM-α培养基(10%胎牛血清,1%青链霉素)重悬,将细胞按照每孔1.2×105个细胞数接种于六孔板中,实验组加含诱导剂(50ug/mL抗坏血酸和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)的培养液,对照组用常规培养液进行培养,每三天更换一次培养液。 三、注意事项 1、实验操作过程中要避免污染。 2、消化时间不宜过长。 3、诱导后细胞易脱壁,换液操作要尽可能轻。 |
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