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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白上样量太大导致柱子变棕色 已有2人参与

如题,akta镍柱纯化蛋白的时候,上样量太大导致柱子变棕色了,而且目的蛋白洗脱不下来
之前上样量小的时候可以洗下来,但浓度很低,所以我加大了上样量,结果柱子变成了棕色,目的蛋白也洗不下来了T T
有人知道这种情况该怎么处理吗?

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wander0000

新虫 (初入文坛)

会不会是异物?我的柱子也是,上面一层棕色

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6楼2017-07-19 07:35:17
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yuanye001

新虫 (初入文坛)

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-07-08 09:18:47
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yuanye001

新虫 (初入文坛)

3楼2017-07-08 09:18:53
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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuanye001 at 2017-07-08 09:18:47
加DTT洗

好的谢谢

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4楼2017-07-08 20:44:07
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西西sm

新虫 (正式写手)

你现在在做蛋白纯化么?

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5楼2017-07-19 07:31:02
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

如果样品不是完全透明无色的话  柱子变色也是正常的
你用的是预装柱还是用填料自己装的柱子?建议先明确柱子载量  

蛋白洗脱不下来  用最大浓度咪唑也洗不下来吗
7楼2017-07-19 11:46:19
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

首先你的蛋白是否是带颜色的。带颜色的蛋白(如胰蛋白酶棕褐色)量大量自然而然的柱子会带色。洗脱时,可以逐渐加大咪唑的浓度,和改变pH试试。
8楼2017-08-01 11:44:10
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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)

9楼2017-08-02 21:00:36
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

柱子变棕色,镍离子已经脱离了,你的样品里面有EDTA或者是还原剂,换镍柱,用可以耐受100mM EDTA和10mM的还原剂的镍柱的镍柱,如武汉汇研的Ni-6FF(TED)
10楼2017-08-08 11:04:21
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