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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白上样量太大导致柱子变棕色
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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白上样量太大导致柱子变棕色 已有2人参与

如题，akta镍柱纯化蛋白的时候，上样量太大导致柱子变棕色了，而且目的蛋白洗脱不下来
之前上样量小的时候可以洗下来，但浓度很低，所以我加大了上样量，结果柱子变成了棕色，目的蛋白也洗不下来了T T
有人知道这种情况该怎么处理吗？

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1楼 2017-07-03 08:56:33
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wander0000

新虫 (初入文坛)
会不会是异物？我的柱子也是，上面一层棕色

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6楼2017-07-19 07:35:17
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普通回帖

yuanye001

新虫 (初入文坛)
加DTT洗

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

蓬蓬的号
2楼2017-07-08 09:18:47
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yuanye001

新虫 (初入文坛)
试试

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3楼2017-07-08 09:18:53
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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuanye001 at 2017-07-08 09:18:47
加DTT洗

好的谢谢

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4楼2017-07-08 20:44:07
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西西sm

新虫 (正式写手)
你现在在做蛋白纯化么？

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5楼2017-07-19 07:31:02
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
如果样品不是完全透明无色的话  柱子变色也是正常的
你用的是预装柱还是用填料自己装的柱子？建议先明确柱子载量  

蛋白洗脱不下来  用最大浓度咪唑也洗不下来吗
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7楼2017-07-19 11:46:19
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

首先你的蛋白是否是带颜色的。带颜色的蛋白（如胰蛋白酶棕褐色）量大量自然而然的柱子会带色。洗脱时，可以逐渐加大咪唑的浓度，和改变pH试试。
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8楼2017-08-01 11:44:10
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蓬蓬的号

新虫 (初入文坛)
谢谢啦

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9楼2017-08-02 21:00:36
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

柱子变棕色，镍离子已经脱离了，你的样品里面有EDTA或者是还原剂，换镍柱，用可以耐受100mM EDTA和10mM的还原剂的镍柱的镍柱，如武汉汇研的Ni-6FF(TED)
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10楼2017-08-08 11:04:21
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