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就不信还有人

新虫 (初入文坛)

[求助] βactin 不齐 已有3人参与

以前都没问题,停做WB三个月又开始做,最近四五次βactin 总是不齐,有定量蛋白,但是总是有个别孔蛋白跑出来比其他高,求高手指点

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王大可可可可

新虫 (小有名气)

你和我前段时间状态一样。

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2楼2017-07-01 00:47:03
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王大可可可可

新虫 (小有名气)

我的经验:测蛋白浓度,先跑内参,再根据结果做调整,一定不要着急,前几次我就是目标蛋白出来了,结果内参出不来,后来还不齐

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3楼2017-07-01 00:48:57
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把蛋白定量做好,定量准确了后续的操作都一样,内参一般不会有问题的!
不作死不会死!!!
4楼2017-07-01 08:38:56
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qd214387

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我有一个办法,你可以根据不齐的内参或多或少去上样本,这么做在国外是可以接受的。或者你考虑一下你的处理是不是就是影响beta-actin的表达量。
5楼2017-07-02 11:26:25
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gwy1018

新虫 (初入文坛)

我跟你一样
6楼2017-07-10 10:24:03
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七夕仙兰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我是直接按照蛋白量上样,体积可能不一样,比如1号10ug,体积10ul,2号10ug,8ul,3号10ug,12ul,但是各样品初始浓度不要相差太离谱,要不然还是很难调齐
7楼2017-07-30 12:03:38
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