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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » βactin 不齐
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就不信还有人

新虫 (初入文坛)

[求助] βactin 不齐 已有3人参与

以前都没问题，停做WB三个月又开始做，最近四五次βactin 总是不齐，有定量蛋白，但是总是有个别孔蛋白跑出来比其他高，求高手指点

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1楼 2017-06-30 18:02:03
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王大可可可可

新虫 (小有名气)
你和我前段时间状态一样。

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2楼2017-07-01 00:47:03
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王大可可可可

新虫 (小有名气)
我的经验：测蛋白浓度，先跑内参，再根据结果做调整，一定不要着急，前几次我就是目标蛋白出来了，结果内参出不来，后来还不齐

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3楼2017-07-01 00:48:57
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把蛋白定量做好，定量准确了后续的操作都一样，内参一般不会有问题的！
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不作死不会死！！！
4楼2017-07-01 08:38:56
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qd214387

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我有一个办法，你可以根据不齐的内参或多或少去上样本，这么做在国外是可以接受的。或者你考虑一下你的处理是不是就是影响beta-actin的表达量。
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5楼2017-07-02 11:26:25
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gwy1018

新虫 (初入文坛)
我跟你一样
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6楼2017-07-10 10:24:03
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七夕仙兰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我是直接按照蛋白量上样，体积可能不一样，比如1号10ug，体积10ul，2号10ug，8ul，3号10ug，12ul，但是各样品初始浓度不要相差太离谱，要不然还是很难调齐
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7楼2017-07-30 12:03:38
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