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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » P不出条带来，求帮忙分析下
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懒惰的小猴子

新虫 (正式写手)

[求助] P不出条带来，求帮忙分析下

设计了5个引物，分别做了根和叶的pcr实验，我的模板是反转录CDNA，加0.6微升，引物各0.6微升，Taq酶10微升，目的片段是一百多到两百多bp。电泳结果如图。左侧5个泳道是叶，右侧5个泳道是根。图一感觉有拖尾，而且条带不是很亮。图二是第二次pcr，前四个引物每个引物的退火温度都提高了0.5度，最后一个引物提高了1度，反而出现了好多条条带。而且叶的电泳条带两次电泳都不亮，是引物的问题吗？这种情况我该怎么改进？求帮忙分析一下

P不出条带来，求帮忙分析下
1.jpg


P不出条带来，求帮忙分析下-1
2.jpg
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1楼 2017-06-29 09:54:52
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懒惰的小猴子

新虫 (正式写手)
第1泳道和第6泳道是内参基因
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2楼2017-06-29 09:56:35
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伤何处

木虫 (正式写手)
taq?10ul?
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
3楼2017-06-29 10:07:37
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2017-06-29 21:08:13
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Angle_Hebe

木虫 (正式写手)
taq酶加多，非特异性扩增

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5楼2017-06-29 23:51:27
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lvgaoqiang

新虫 (小有名气)
200片段和引物而具体能区分开吗，目的片段太小，

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6楼2017-10-11 15:40:23
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潇衍77

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-16 07:46:47
引响pcr的有很多因素，模板质量，引物浓度，退火温度等都会有一定的影响。你具体要解决的是条带淡的问题还是什么问题呢？

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7楼2017-10-16 00:11:19
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圣地大学

新虫 (小有名气)
我也p基因遇到了问题，我是p不出来，什么都没有！模板换了几个！还是p不出来

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8楼2017-10-16 22:40:29
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