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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 克隆死活做不出来，求助大神
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叶子叶子ling

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆死活做不出来，求助大神 已有5人参与

总共要构建三个质粒，因为片段较多，整个载体大概14k的样子，先后尝试了五个片段的Gibson以及酵母组装，其中有一个质粒（大概11k）通过Gibson的方法得到了，其他的两个用Gibson要么不长，要么就是验证错的，用酵母组装的方式，在酵母能长，提酵母质粒转大肠就长不了，之前构建出来的那个质粒提酵母质粒转大肠也不长。后来尝试了用overlap减少片段数到三个或是四个，再进行Gibson还是和之前的情况一样，求问还能通过什么方式啊，跪求

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1楼 2017-06-28 12:54:26
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伤何处

木虫 (正式写手)
★
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Golden Gate技术也可以用于多片段的组装。
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
2楼2017-06-28 16:00:15
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安静过生活

银虫 (初入文坛)
★
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你可以把片段扩上酶切位点，一段一段装，不要一起装进载体。

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3楼2017-06-29 23:02:11
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付首颖

新虫 (初入文坛)
★
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我的也是，你现在解决了吗
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努力去做
4楼2017-07-14 10:06:12
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斯塔万格

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静过生活 at 2017-06-29 23:02:11
你可以把片段扩上酶切位点，一段一段装，不要一起装进载体。

能具体说一说是怎么做的吗？求解

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5楼2021-06-19 16:14:47
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局也土豆

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 斯塔万格 at 2021-06-19 16:14:47
能具体说一说是怎么做的吗？求解
...

就是在目地基因加上酶切位点的意思吧

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6楼2021-06-20 09:50:32
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