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wujie412

铜虫 (小有名气)

[交流] 我的蛋白怎样侧浓度呀 快帮帮我 大虫们

我用GST融合一个38氨基酸的酸性蛋白,表达后,用THROMBIN酶切,可酶切后的液体没办法测到有蛋白。我怀疑有两个原因,一,THROMBIN没有把这个小蛋白切下来,但THROMBIN效率没问题,可以切下来另一蛋白。二,因为小蛋白是只有一个丝氨酸,5个赖氨酸,其它都是谷氨酸和天冬氨酸,所以BCA和考马斯亮蓝法都不能测其浓度。我的怀疑有道理吗?我应该怎末办?请帮帮我。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-20 at 12:28 ]
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


小蛋白?多大?跑胶看不见吧。
2楼2009-01-15 22:13:44
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wujie412

铜虫 (小有名气)

4KD 可以跑尿素胶 但染色还是成问题 考染可能不行 银染也不知道
3楼2009-01-15 22:23:21
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论~欢迎常来~ 1-17 23:43
BCA或Lowry法测的是肽键,应该可以
还可以测214NM紫外吸收
4楼2009-01-16 09:58:05
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


4KDa看不见。
5楼2009-01-16 14:46:58
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wujie412

铜虫 (小有名气)

BCA或Lowry法测的不是肽键 是一些氨基酸 不包含我的蛋白的氨基酸
6楼2009-01-17 18:23:49
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

LoWry法是双缩脲法(BIureT)和福林酚法(FolIn-酚)的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后,碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应,形成铜—蛋白质的络合盐。
7楼2009-01-17 20:05:33
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