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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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吓成驴

超级版主

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[求助] 加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导 已有3人参与

目的片段连接的T1载体,转化的dh5α,平板加的卡那抗生素,为什么培养基会长成一片?我凃板时,涂了好久,干了啊?有没有可能是目的片段插到了卡那抗性的那个基因位点?请问那个目的基因连接在载体上是随机连接上的吗,还是就是固定连接在lacz那个位置的?小白研究生,刚刚新建的实验室,就只有我一个人,啥都不懂,好慌,求大神详细指点

加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导
IMG_20170616_113803.jpg


加抗生素的平板,目的基因连接转化,菌长成一片,求指导-1
IMG_20170616_dha5单克隆失败.jpg
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狗屎运

主管区长

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转化时加的重组质粒太多了吧

发自小木虫Android客户端
2楼2017-06-18 17:12:34
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宁文峰

兑换贵宾

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抗生素问题概率大一点,连接产物  也不会长这么多

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所追求的不在明天,而在现在以前
5楼2017-06-18 17:29:33
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一叶知秋365

版主

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
吓成驴: 金币+5, 好的,我试试amp, 2017-06-21 19:39:29
抗生素问题可能性大一些,可能抗生素失效,或者温度太高,之前有遇到过培养基温度低快凝固加抗生素也会有这种情况。此外,转化后摇菌时间是否太长?此外你用的peasy t1?这个载体有两种抗性,换amp试试。

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20楼2017-06-21 16:22:30
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小松鼠45

新虫


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-19 11:56:41
抗生素要配成一千倍母液,-20度保存。用的时候,等培养基晾到不烫手的时候加进去,摇匀后倒平板。

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8楼2017-06-19 00:14:20
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547star

版主

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
考虑以下处理:换不同菌株重新制备感受态细胞,换新的抗生素,转化液在不确定转化效率的情况下每个板加的量成倍数减少。
为什么
11楼2017-06-19 11:37:48
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六维空想

兑换贵宾

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我之前也遇到过这样  抗生素失效

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13楼2017-06-19 15:27:43
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purple梦天使

专家顾问

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抗生素失效了,不然就是菌液浓度太大,涂的菌液太多。抗生素失效的概率大

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15楼2017-06-19 23:49:57
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sheng_1210

主管区长

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抗生素失效了,我之前也遇到过这种情况,重新配板吧

发自小木虫IOS客户端
16楼2017-06-21 10:17:57
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大帅的巨蟹

兑换贵宾

宝石虫

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为世界寻找一个合理的答案
17楼2017-06-21 10:50:41
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笨猪0503

实习版主

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应该是抗生素的问题,以前也遇到过,这个建议使用amp+kn同时筛
学习.......
22楼2017-06-21 19:46:15
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普通回帖

sunqx

主管区长

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3楼2017-06-18 17:15:42
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发光风格化

实习版主

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4楼2017-06-18 17:18:48
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王查查23

管理员

本帖内容被屏蔽

6楼2017-06-18 23:52:17
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luoyl210

主管区长

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7楼2017-06-19 00:10:20
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Unavos_李洋

管理员

轻微抑郁的

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卡那霉素不好使了的可能性要大一些。

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知退方进,向死而生。
9楼2017-06-19 07:48:34
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吕玉平

管理员

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是抗生素失效,也有可能是你涂平板的体积太大,浓度太高。
每天的目标就是过的充实
10楼2017-06-19 08:42:47
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