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波特先森

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建干扰载体,连接目的片段到T载体上为什么总是找不到反向连接?

我现在要构建干扰载体,但出于设计的原因,在目的片段扩增出来连接到T载体上后,需要找目的片段反向连接到T载体上的结果进行后续操作,可是前后送测序了20多个样,只有最初有一个反向连接的,但偏偏扩增出的目的片段中间缺失了一个碱基,其余全部是正向连接,请问这是什么原因啊?

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