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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 连接表达载体菌液pcr有条带但是提不出质粒
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] 连接表达载体菌液pcr有条带但是提不出质粒 已有1人参与

用T4连接酶简介片段和表达载体后，板上只长了一个菌，挑菌摇菌后，菌液pcr有条带，但是提不出来质粒是什么原因？最近在做5个片段，长得菌都特别少，最多的也就长四个菌，是因为什么的？目前只成功连上了一个片段，但是同样的条件别的片段就是连不上是是什么原因呢？

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1楼 2017-06-14 18:45:45
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
表达载体长得会比减慢，所以可能提不出来，建议加大培养基用量，再就是这个克隆按你说的应该是，你可以把剩下的菌液取1微升再稀释500倍左右涂一个平板看一看，再挑克隆摇菌验证，没问题了提质粒应该就能提出来。菌长的少跟你连接时间，连接酶效率，pcr产物浓度，感受态用量都有关系，挨个分析就可以了。
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学习，交流
2楼2017-06-15 09:27:30
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jcstone1027 at 2017-06-15 09:27:30
表达载体长得会比减慢，所以可能提不出来，建议加大培养基用量，再就是这个克隆按你说的应该是，你可以把剩下的菌液取1微升再稀释500倍左右涂一个平板看一看，再挑克隆摇菌验证，没问题了提质粒应该就能提出来。菌长 ...

谢谢啦，但是现在还是连不上，之前那个提不出来质粒的可能就是因为没有连接上的原因

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3楼2017-06-30 13:28:44
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