24小时热门版块排行榜

返回列表

倍辉科技

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 945.4
散金: 116
红花: 1
帖子: 26
在线: 13.9小时
虫号: 5885202
注册: 2017-03-08
专业: 细胞生物学研究中的新方法

[交流] 激光全息细胞成像及分析系统检测药物介导的细胞毒性已有1人参与

激光全息细胞成像及分析系统检测药物介导的细胞毒性                      ------细胞周期分析
前言
  细胞周期通常作为药效评价的一个检测指标。检测药效可以阻止由于不当的治疗方法引起的肿瘤扩散以及耐药性性的形成。流式细胞仪分析细胞周期通常用来获得药效信息。该方法基于DNA染色，是一种检测细胞周期的直接方法。然而该种方法需要从培养的细胞中取出一部分肿瘤细胞用来标记分析。浪费了病人样本，并且该方法需要多步操作，既浪费了样本有浪费了时间。数字全息显微镜（DHM）为细胞学研究提供了一种非侵入方法，可以同时分析很多细胞参数，例如细胞数量，聚集度以及体积等。不需悬浮细胞，在细胞贴壁生长时即可完成分析。该研究的目的是DHM是否可以用来观察药物处理细胞后细胞周期停滞，以此提供一种非破坏方法替代流式细胞分析。收集鼠成纤维细胞系L929细胞从G1和G2/M期的DHM参数。使用流式细胞仪验证细胞周期停滞。这篇研究表明DHM可以检测到G1或者G2/M期细胞周期停滞中相体积的变化。星孢菌素作用的G1停滞，平均细胞相体积减少。而秋水仙胺和依托泊苷处理的G2/M周期停滞平均细胞相体积增多。使用剂量依赖的依托泊苷处理细胞后，DHM分析的细胞体积变化的准确性可以与流式细胞仪分析结果相匹敌。平均细胞相体积变化可以作为细胞周期停滞药物处理细胞后DHM观察培养的哺乳动物细胞的标记。
材料方法
  鼠成纤维细胞L929（Invitrogen）单层培养于含10%胎牛血清（FCS,Invitrogen),1%青霉素/链霉素的MEM培养基（Invitrogen）。将细胞放置于37℃、5%CO2及饱和湿度条件下的培养箱中。每48h更换一次培养基，每周接种一次。
结果

细胞接种于25cm2的培养皿中，细胞密度2.5×103，加入不含有FCS的培养基4.3ml，培养24h，分别用20nM的星孢菌素（Invitrogen）、3μM的秋水仙胺（Santa Cruz）、0.1-10μM依托泊苷(Sigma-Aldrich)以及含有0.1%DMSO(Sigma-Aldrich)的含血清培养基处理细胞。24小时后使用DHM分析细胞。左图是DHM ，图片中的颜色是添加的伪彩，代表的是厚度，厚度依次为白色>红色>绿色。右图表示的三种药物处理L929细胞后，DHM分析的细胞数，聚集度，体积参数的变化。研究表明星孢菌素（STS）、秋水仙胺(COL)、依托泊苷(ETO)都可以使细胞数量减少。星孢菌素使细胞大小减小，而秋水仙胺、依托泊苷使细胞增大。只有依托泊苷(ETO)处理使细胞数目明显减少。所有的处理都使细胞聚集度减少。与对照组相比，星孢菌素（STS）减小细胞相体积70%，秋水仙胺(COL)、依托泊苷(ETO)分别增大细胞相体积140%和170%。

细胞接种于25cm2的培养皿中，细胞密度2.5×103，加入不含有FCS的培养基4.3ml。培养24小时，分别用20nM的星孢菌素（Invitrogen）、3μM的秋水仙胺（Santa Cruz）、0.1-10μM依托泊苷(Sigma-Aldrich)以及含有0.1%的DMSO(Sigma-Aldrich)的含血清的培养基处理细胞。24小时后使用流式细胞仪分析细胞周期停滞。图2研究表明对未处理对照组比，星孢菌素（STS）处理L929细胞后，S期和G2和M期细胞数量减少，G1期细胞数量增多。相反的是秋水仙胺(COL)、依托泊苷(ETO)处理L929细胞后，G1期和S期细胞数减少，G2/M期细胞增多。
参考文献
Digital Holographic Microscopy for Non-Invasive Monitoring of Cell Cycle Arrest in L929 Cells
PLOS ONE 2014

回复此楼