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梅雪芳新虫 (小有名气)
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如何选择用哪种小RNA干扰？已有1人参与
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我要转染的是原代细胞，现在我了解到的小RNA种类主要有siRNA,shRNA慢病毒载体,shRNA质粒载体。相对来说siRNA生产周期短、价格低廉、起效快，但是半衰期也短，一般用于初期筛选验证和瞬时功能实验，由于合成后不能像质粒一样反复抽提，每次用完要重新合成，所以不适合加荧光；shRNA病毒生产周期长、价格相对较高、起效慢，但是可以稳定持续表达，非常适合构建稳定细胞株或者需要长期表达的实验；shRNA质粒的作用特点介于前两者之间，最大的优势是质粒可以反复扩增抽提，不需要二次订购，但是转染效率好像不如慢病毒。 1，siRNA的半衰期有多短？我是做原代细胞，不需要长期表达。转染成功后大概进行3天左右实验即可。 2，由于是即时分离的原代细胞，每批细胞都要转染，可能用量较多。 3，有荧光标记方便观察的话更好 4，我是做原代的免疫细胞，需要尽量减少对细胞免疫功能等方面的影响 ? ? siRNA好像是最理想的，每次合成加荧光好像不太划算，shRNA质粒载体比较适合加荧光，也稳定，可以反复抽提，但是据说转染效率不如另外两种，尤其是我这种原代细胞，shRNA慢病毒载体贵一些，而且不知道会不会影响细胞的免疫功能。。。该如何选择？ 发自小木虫Android客户端 |
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5楼2017-08-27 15:31:21