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小李纸11银虫 (正式写手)
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[求助]
求助，镍柱目的蛋白，结果得到三个条带，该如何除去另外两种杂蛋白？ 已有1人参与
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如题，用大肠杆菌表达带His标签的目的蛋白，载体是pCold载体，表达后过镍柱纯化，结果洗脱下来的流分里除了目的蛋白外还有两种杂蛋白，含量和目的蛋白不相上下，过柱是先用咪唑浓度20mM的洗脱液洗杂蛋白，基本洗掉了杂蛋白，就剩两种没洗下来。然后用咪唑浓度500mM的洗脱液进行洗脱，那两种杂蛋白就和目的蛋白一起被洗下来了，而且量和目的蛋白差不多。现在我该如何除去这两种杂蛋白呢？如图，红圈里是目的蛋白，我的目的蛋白是最上面的那个，下面还有两种杂蛋白。我是增梯度还是调PH呢？增梯度的话按什么原则设梯度？调PH又该往哪边调呢？ 纯化 |
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