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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于WB一抗孵育的方法优化
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雁城雪

新虫 (小有名气)

[交流] 关于WB一抗孵育的方法优化

本人想在做WB时，节省一抗的用量，想问问各位虫友有没有人用杂交袋孵育一抗的，用这个方法应该注意哪些问题，之前做的总是不太好，哪位有经验的虫友能否交流一下？先谢谢啦！

关于WB一抗孵育的方法优化


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1楼 2017-06-08 21:32:14
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MulanQahar

金虫 (正式写手)
方法， 先把parafilm铺好，四边固定（用手摁一下）, 然后prepare 500uL 的 primary anyibody solution, mix well 后，一滴一滴的点到准备好的parafilm 上。再把 membrane 面朝下的扑在上面。室温一小时，或四度 (静置）overnight

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17楼2017-06-13 07:07:07
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梅花寒香

银虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
我们用的塑封膜，目的条带处不要有气泡，就行了。

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3楼2017-06-08 23:12:38
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梅花寒香 at 2017-06-08 23:12:38
我们用的塑封膜，目的条带处不要有气泡，就行了。

请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？

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4楼2017-06-08 23:23:04
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梅花寒香

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-08 23:23:04
请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？
...

我们只是把凝胶上的目的条带切下来，再转膜。所以不会有这么大的膜，有点浪费。孵育是4℃慢摇

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5楼2017-06-08 23:29:08
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梅花寒香

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-08 23:23:04
请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？
...

塑封膜应该和你这个一样，就是尽量赶走气泡

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6楼2017-06-08 23:31:44
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 梅花寒香 at 2017-06-08 23:31:44
塑封膜应该和你这个一样，就是尽量赶走气泡
...

好的，我知道啦，谢谢啦！

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7楼2017-06-08 23:47:54
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拜拜涂

新虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
4度摇床过夜

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8楼2017-06-09 00:13:33
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 拜拜涂 at 2017-06-09 00:13:33
4度摇床过夜

好的，谢谢

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9楼2017-06-09 12:07:37
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花花贝

金虫 (知名作家)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
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8楼: Originally posted by 拜拜涂 at 2017-06-09 00:13:33
4度摇床过夜

这个最好，

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11楼2017-06-09 22:02:35
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端粒酶~

新虫 (初入文坛)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
我用的液体体积是两毫升，。挤出气泡，，4摄氏度摇床过夜，。或者孵2小时。。

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12楼2017-06-10 23:59:54
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 端粒酶~ at 2017-06-10 23:59:54
我用的液体体积是两毫升，。挤出气泡，，4摄氏度摇床过夜，。或者孵2小时。。

袋子跟我的是一样大的嘛

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13楼2017-06-11 15:54:07
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xuelong920

新虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
没有用杂交袋孵育过一抗，自己也在做western，用的Abcam的抗体，用TBS按照1:5000稀释后，孵育1h，很方便。结果也很好。楼主可以试试。
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14楼2017-06-12 18:18:05
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by xuelong920 at 2017-06-12 18:18:05
没有用杂交袋孵育过一抗，自己也在做western，用的Abcam的抗体，用TBS按照1:5000稀释后，孵育1h，很方便。结果也很好。楼主可以试试。

谢谢，我之前也是用的你说的方法，现在想改进实验方法主要是为了节约抗体的用量。

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15楼2017-06-12 19:59:34
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MulanQahar

金虫 (正式写手)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
有比这个更省的方法

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16楼2017-06-13 07:04:14
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雁城雪

新虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by MulanQahar at 2017-06-13 07:07:07
方法， 先把parafilm铺好，四边固定（用手摁一下）, 然后prepare 500uL 的 primary anyibody solution, mix well 后，一滴一滴的点到准备好的parafilm 上。再把 membrane 面朝下的扑在上面。室温一小时，或四度 (静 ...

请问只静止，不摇动这样做的效果怎么样啊

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18楼2017-06-13 16:01:44
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MulanQahar

金虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-13 16:01:44
请问只静止，不摇动这样做的效果怎么样啊
...

没问题

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19楼2017-06-13 21:45:23
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雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by MulanQahar at 2017-06-13 21:45:23
没问题
...

好的，非常感谢，我试试看

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20楼2017-06-13 22:30:10
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
推荐labome上一篇wb的Protocol, Troubleshootings文章吧：
https://www.labome.com/method/We ... s-and-Reagents.html
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21楼2017-06-18 12:20:14
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syhorchid2楼
2017-06-08 22:50   回复  
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
wdxmu10楼
2017-06-09 17:39   回复  
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
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