应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于WB一抗孵育的方法优化
211/1返回列表
查看: 5046  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雁城雪

新虫 (小有名气)

[交流] 关于WB一抗孵育的方法优化

本人想在做WB时，节省一抗的用量，想问问各位虫友有没有人用杂交袋孵育一抗的，用这个方法应该注意哪些问题，之前做的总是不太好，哪位有经验的虫友能否交流一下？先谢谢啦！

关于WB一抗孵育的方法优化


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2017-06-08 21:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

MulanQahar

金虫 (正式写手)
方法， 先把parafilm铺好，四边固定（用手摁一下）, 然后prepare 500uL 的 primary anyibody solution, mix well 后，一滴一滴的点到准备好的parafilm 上。再把 membrane 面朝下的扑在上面。室温一小时，或四度 (静置）overnight

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2017-06-13 07:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅花寒香

银虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
我们用的塑封膜，目的条带处不要有气泡，就行了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-06-08 23:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梅花寒香 at 2017-06-08 23:12:38
我们用的塑封膜，目的条带处不要有气泡，就行了。

请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-06-08 23:23:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅花寒香

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-08 23:23:04
请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？
...

我们只是把凝胶上的目的条带切下来，再转膜。所以不会有这么大的膜，有点浪费。孵育是4℃慢摇

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-06-08 23:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅花寒香

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-08 23:23:04
请问就像我拍的图片这样嘛，孵育的条件是摇床脱色还是4度静止较好？
...

塑封膜应该和你这个一样，就是尽量赶走气泡

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-06-08 23:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 梅花寒香 at 2017-06-08 23:31:44
塑封膜应该和你这个一样，就是尽量赶走气泡
...

好的，我知道啦，谢谢啦！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-06-08 23:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拜拜涂

新虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
4度摇床过夜

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2017-06-09 00:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 拜拜涂 at 2017-06-09 00:13:33
4度摇床过夜

好的，谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2017-06-09 12:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花花贝

金虫 (知名作家)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
8楼: Originally posted by 拜拜涂 at 2017-06-09 00:13:33
4度摇床过夜

这个最好，

发自小木虫Android客户端
回复此楼
11楼2017-06-09 22:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

端粒酶~

新虫 (初入文坛)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
我用的液体体积是两毫升，。挤出气泡，，4摄氏度摇床过夜，。或者孵2小时。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2017-06-10 23:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 端粒酶~ at 2017-06-10 23:59:54
我用的液体体积是两毫升，。挤出气泡，，4摄氏度摇床过夜，。或者孵2小时。。

袋子跟我的是一样大的嘛

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2017-06-11 15:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuelong920

新虫 (小有名气)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
没有用杂交袋孵育过一抗，自己也在做western，用的Abcam的抗体，用TBS按照1:5000稀释后，孵育1h，很方便。结果也很好。楼主可以试试。
赞一下 回复此楼
14楼2017-06-12 18:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by xuelong920 at 2017-06-12 18:18:05
没有用杂交袋孵育过一抗，自己也在做western，用的Abcam的抗体，用TBS按照1:5000稀释后，孵育1h，很方便。结果也很好。楼主可以试试。

谢谢，我之前也是用的你说的方法，现在想改进实验方法主要是为了节约抗体的用量。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2017-06-12 19:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MulanQahar

金虫 (正式写手)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
有比这个更省的方法

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2017-06-13 07:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by MulanQahar at 2017-06-13 07:07:07
方法， 先把parafilm铺好，四边固定（用手摁一下）, 然后prepare 500uL 的 primary anyibody solution, mix well 后，一滴一滴的点到准备好的parafilm 上。再把 membrane 面朝下的扑在上面。室温一小时，或四度 (静 ...

请问只静止，不摇动这样做的效果怎么样啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-06-13 16:01:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MulanQahar

金虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 雁城雪 at 2017-06-13 16:01:44
请问只静止，不摇动这样做的效果怎么样啊
...

没问题

发自小木虫Android客户端
回复此楼
19楼2017-06-13 21:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雁城雪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by MulanQahar at 2017-06-13 21:45:23
没问题
...

好的，非常感谢，我试试看

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
20楼2017-06-13 22:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
推荐labome上一篇wb的Protocol, Troubleshootings文章吧：
https://www.labome.com/method/We ... s-and-Reagents.html
赞一下 回复此楼
21楼2017-06-18 12:20:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
syhorchid2楼
2017-06-08 22:50   回复  
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
wdxmu10楼
2017-06-09 17:39   回复  
雁城雪(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 雁城雪 的主题更新
211/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭