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海天之恋木虫 (小有名气)
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[交流]
公司买回来的抗体、酶标抗体当初都是如何定量的了?
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本人最近刚接触ELISA这一块,涉及到抗体的酶分子标记及定量,有几个小问题一直没有搞明白,在这里想向业内的高手们请教一下,望各位施以援手,先说声:谢谢了![]() ![]() 1.文献中抗体标记前一般都得先透析除盐,但均没有指明这个盐浓度多高时需要透析,我买回来的抗体保存液为(0.01M PBS,0.015M NaN3),这样的抗体在标记前还需要事先透析除盐吗? 2.抗体每次操作时其实体积都很少,经过透析后,液体来回转移,这个过程中,液体应该会有一部分挂在透析袋上,最终导致抗体的部分损失,有没有其他纯化除盐的方法了?比如柱子之内的产品? 2.公司售卖的抗体经纯化后,定量是通过什么方法了?我在实验室通过超微量分光光度计定量可以吗? 3.酶标记的抗体该如何定量了?超微量分光光度计测量A280的值的时候,酶蛋白也会吸光啊,这个最终得到的结果肯定包含酶蛋白的含量,这种酶标记抗体的浓度到底是指单独结合的抗体浓度,还是酶标抗体这个复合物的浓度了? |
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