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hkhk哈哈木虫 (小有名气)
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硅胶柱的相关问题，求各位大神指点 已有1人参与
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新人一个，现在要用硅胶柱层析和 Sephadex LH-20做分离纯化，文献中说：过硅胶柱用不同的梯度洗脱得到14种级分，只选择11-12级分继续过硅胶柱，然后用 Sephadex LH-20纯化，现有以下疑问： 1.硅胶只说了200-300目， Sephadex LH-20的规格也没有说，这两种柱子要自己做还是买，因为之前没有接触过不太了解 2.文献中说得到14种级分，为什么只选择11-12种级分啊，如何确定分离出的物质是你要提取的物质（没有标样） 3.硅胶柱和 Sephadex LH-20具体的实验方法是啥？有相关的教程吗？完全没有做过，没有头绪。 |
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 Sephadex LH-20 |
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【答案】应助回帖
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1.一般都是买，硅胶常用青岛海洋化工的，200目很常见的。LH-20，国内无数代理厂商，最好的就是GE，http://www.gelifesciences.com.cn/CNLS/searchNewAction.action 这个填料很贵，珍惜使用。一般是装填在玻璃柱里。 2.这个一般都是TLC（硅胶）实时监测。有两个问题需要确认，样品里都有什么，在TLC水顺序是什么，然后硅胶柱洗脱顺序一般一样，LH-20洗脱下来的东西，可能需要LC-PDA或者LC_MS检测。 如果没有标样，那最好是LC-MS，有高分辨最好。 3.这两个最麻烦的就是装柱和检测。后面拌样，洗脱，蒸干都还好。有很多博硕士论文在这方面都很详细的，你找一篇相关的好好看看。 给你推荐两个简单的： https://wenku.baidu.com/view/de1c75d0b9f3f90f76c61b24 https://wenku.baidu.com/view/c271f2b8f121dd36a32d8259 https://wenku.baidu.com/view/f58cc01fc5da50e2524d7fd9 |
2楼2017-06-05 11:16:23
hkhk哈哈
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【答案】应助回帖
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硅胶柱一般不重复，毕竟价格便宜。LH-20都是重复的，装好一次以后，可以用很久。 所以硅胶可以不过膜，LH一般都会过膜， Rf只是一个简单参考，如果周围没有别的点，那就可以。 最好是按照文献上的来，直接洗脱，容易导致上面的点下来的快，和后面重叠。 |
4楼2017-06-05 14:01:18
5楼2017-06-06 15:09:15
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7楼2017-06-08 08:58:27