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baican木虫 (正式写手)
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[求助]
胆碱酯酶亲和层析求助
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各位亲： 小白一名，需要对组织提取的胆碱酯酶进行纯化，参考不同的文献条件，断断续续进行了将近4个月，没有任何进展，抓狂。 1. 情况如下： 1.1 没有UV设备，目前通过考马斯亮蓝法测收集液的蛋白含量，但每一次检测的洗脱液蛋白含量均是0，而测BSA或粗酶提取液没有问题。 1.2 有文献用四乙基碘化铵进行竞争性洗脱，但四乙基碘化铵对酶有抑制作用。 那么问题来了，如何确定洗脱下来的是酶？ 2. 亲和柱为以普鲁卡因胺为亲和配基，与溴化氰活化的sepharose-4B偶联： 2.1 如何检测普鲁卡因胺是否偶联上？ 2.2 如何检测胆碱酯酶与柱的亲和力？ 2.3 如何判断胆碱酯酶是否挂上柱？ 思绪有点乱，暂时这些，不知是否表达清楚 |
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