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slp110

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题

向大神求助：将我的目的基因连接在pYES2载体上，通过电转导入到酵母缺陷株gat1中进行功能表达，在sc-u尿嘧啶缺陷型平板上要三天才能长出白斑，继续长两三天菌斑依然很小，接种到sc-u液体培养基中菌长不起来，长四五天液体培养基依然澄清，但是菌液PCR能扩出目的条带，电镜下观察酵母比电转前小很多。接种到YPD液体培养基中菌很快生长起来，菌液PCR也能验证出目的条带，但是在之后扩培过程中发现菌液PCR扩不出目的条带了。请问有遇到这种情况的吗？扩不出目的基因是因为质粒丢了吗？该怎么避免质粒丢失呢？在sc-u液体培养基中菌长不起来，是因为我的基因不适合用酵母做表达而转录受抑制造成的吗？
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1楼 2017-05-28 23:20:40
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