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showhand

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因烟草后代基因检测困难

转外源基因获得了T0代烟草,用快速水煮法提取DNA可以用特异性高的mix酶扩增出目的条带。但是当T0代种子得到的幼苗,用这个办法无法检测出阳性苗,只能依靠CTAB法提取基因组dna后用mix扩增得到目的条带,用普通的taq酶扩增不出来。后续一直T3代也是这个现象。请问各位,我这是基因在后代中被稀释了吗?还是基因掉了?为什么检测的方法越来越复杂才能筛选出来转基因,我的顾虑是我接下来的实验用T3代是否会影响实验结果?谢谢各位!

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zhym63

木虫 (正式写手)

你是什么方法转的?农杆菌?
会不会根本没转进去,T0代是污染的农杆菌,T2代后的植株中污染的农杆菌基本没有了。有的MIX扩增不严谨,可扩增出带。
这个回答可能不容易接受吧!
2楼2017-05-24 09:28:30
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showhand

新虫 (初入文坛)

是农杆菌转的,在T0带是检测过没有污染的哦,哎,反正我现在是没弄明白咋回事

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3楼2017-05-29 00:26:28
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斯克朗

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by showhand at 2017-05-29 00:26:28
是农杆菌转的,在T0带是检测过没有污染的哦,哎,反正我现在是没弄明白咋回事

你好,请问您的快速水煮法提DNA是如何提的?还有您是如何确定T0代没有污染?
ONLY IN THE DARKNESS CAN YOU SEE THE STARS.
4楼2017-06-05 11:48:07
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宁文峰

新虫 (小有名气)

to可能是转化过程中游离在细胞质中的片段,浓度高一点也正常,也就解释了to代假阳性高的原因。。后面代次基因基本整个到基因组里,所以只有基因组可能检测到。。

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所追求的不在明天,而在现在以前
5楼2017-06-12 09:37:28
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