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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 从脐带血中分离的淋巴细胞不贴壁
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dapangwan

新虫 (初入文坛)

[交流] 从脐带血中分离的淋巴细胞不贴壁 已有2人参与

从脐带血中分离了3.4次淋巴细胞，采用的是天津灏阳的淋巴细胞分离液，按照稀释液，抗凝血，分离液1-1-1加入，离心20min，2500rpm。抗凝剂使用的是肝素钠，稀释液两次用的是我自己配置的含0.02%edta的pbs，两次用的是之前提取兔外周血淋巴细胞里面带的稀释液。但是每次都没有贴壁。这是怎么回事呢，好急啊，老板天天说我连个细胞也养不好。

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1楼 2017-05-23 11:15:11
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wuting_pns

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
淋巴细胞本身就是悬浮细胞，在没有细胞因子的刺激下不会增殖。
只有血液里面的单个核细胞中极少数的单核细胞才会贴壁，其余血细胞均不贴壁。
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2楼2017-05-26 12:45:14
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dapangwan

新虫 (初入文坛)
就是来分离单核细胞的，但是基本没有贴壁的，这是什么原因呢

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3楼2017-05-27 11:03:01
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范公子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by dapangwan at 2017-05-27 11:03:01
就是来分离单核细胞的，但是基本没有贴壁的，这是什么原因呢

粘附贴壁法（纯淋巴细胞群的采集）：通常利用单核细胞在37℃和Ca2+存在条件下，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，据此建立许多从单个核细胞悬液中去除单核细胞的方法，藉以获得高纯度的淋巴细胞群。

将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃温箱静置1h左右，单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。
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4楼2017-08-01 00:09:54
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