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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质透析液选择和配制
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才可子

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质透析液选择和配制

本人萌新一枚，最近才开始做蛋白药物修饰，修饰后想要透析除掉杂质小分子。求助各位大神，你们一般用的蛋白透析液都是什么呀？如何避免蛋白质透析过程中的析出呢？因为我的蛋白不是很稳定。。大家都说说自己用的是什么透析液吧~
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1楼 2017-05-22 21:56:59
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jaclynliu

新虫 (初入文坛)
★ ★
才可子(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-23 07:42:15
一般都是从盐浓度，PH值，透析时的温度也很重要，还有一些稳定剂这类的可以做一些变量看看，还有就是你看看你的蛋白质里面有没有二硫键，有的话，就需要根据二硫键的多少计算计算加入DTT的量，你看看一些做蛋白纯化的论文，好多都会有透析这个环节，参考下就知道了吧，我也不是很有经验，只是做过，给点小建议

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2楼2017-05-22 22:31:38
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elise1987

金虫 (著名写手)
★
才可子(金币+1): 谢谢参与
考虑到蛋白的稳定性   选择合适的缓冲液，PBS之类的
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4楼2017-05-26 12:46:54
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echo。xu

木虫 (小有名气)
★
才可子(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by jaclynliu at 2017-05-22 22:31:38
一般都是从盐浓度，PH值，透析时的温度也很重要，还有一些稳定剂这类的可以做一些变量看看，还有就是你看看你的蛋白质里面有没有二硫键，有的话，就需要根据二硫键的多少计算计算加入DTT的量，你看看一些做蛋白纯化 ...

为什么会有二硫键，是氧化了吗

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5楼2017-06-04 10:38:09
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jaclynliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by echo。xu at 2017-06-04 10:38:09
为什么会有二硫键，是氧化了吗
...

有些蛋白质有半胱氨酸残基，在自然环境中就可能氧化形成二硫键，与蛋白质得结构稳定性有关系，但为了增加可溶性，也有的在纯化的时候就加入DTT(二硫苏糖醇)打开二硫键（起到抗氧化的作用），在透析得时候再逐步过滤掉，也有的个别情况在透析得时候也加入少量的DDT,可以增加可溶性，就不容易析出来了，但加入的量需要根据蛋白质的一级序列计算，有多少半胱氨酸要看看才知道哈！（如果有说错的地方请见谅，好久没做实验了）

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8楼2017-06-07 12:02:13
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微微一笑倾我3楼
2017-05-22 23:36   回复  
才可子(金币+1): 谢谢参与
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wdxmu6楼
2017-06-04 15:14   回复  
才可子(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
stabilized7楼
2017-06-04 16:02   回复  
才可子(金币+1): 谢谢参与
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