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siln506103

金虫 (小有名气)

[交流] 如何使用紫外分光光度计测蛋白质的浓度?

请问各位大侠:如何使用紫外分光光度计测蛋白质的浓度?我用的是752PC型的紫外分光光度计。谢谢!~~~

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-21 at 11:00 ]
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广结天下友.......
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★ ★ ★ ★
siln506103(金币+5,VIP+0):谢谢,呵呵
以Bradford方法为例,先用标准样品BSA(1-20μg)+800μBradford diluted solution(normal 1:5diluted) 做一个线性标准曲线,要求数值R2在0.99以上;然后取待测的样品大约3μ-5μ(不同蛋白可能取的量不一样,根据经验)+800μ的Bradford diluted solution,然后,放在比色皿里cuvette(一次性的)。
inverting 之后,将mixturein incubate about 5min at room temperature,then detemined at 595nm spectrophotometer,samples were measured as duplicates and triplicates(2-3个重复),然后把数值(平均值)带入到标准曲线里得出x值,再进行体积换算,就ok了。
用的都是英文的protocol,大概就是这些,我做的样品是拟南芥总蛋白

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-9 at 20:44 ]
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-01-09 20:40:29
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