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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 PCR产物电泳跑出条带了，但公司却说没测出来结果！为什么？
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haifeng8882

[交流] 求助 PCR产物电泳跑出条带了，但公司却说没测出来结果！为什么？

如题目，我的16S rRNA P出来了，但为什么公司说没测出结果？
帮忙分析分析！如下图

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-21 at 10:59 ]
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1楼 2009-01-09 15:37:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
haifeng8882(金币+1,VIP+0):谢谢你的提醒
因为有dimer，干扰测序
同时可能循环太多产生突变，干扰测序
克隆16s？做多样性分析？
那一般要连上质粒再测会好一些，直接测不好
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2楼2009-01-09 15:40:03
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haifeng8882

谢谢楼上，那我应该怎样才能顺利的做出结果 啊 ？
新手刚开始，还有许多需要学习！
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3楼2009-01-09 15:44:38
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
如果公司说测不出来，那原因就有很多了，包括你的样品很纯这种情况下（我认为你的样品电泳很好），他们也有可能说测不出来，所以，建议你还是把样品送到一家比较可靠的生物公司吧。
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-09 18:35:14
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zhenyu19

木虫 (小有名气)

嘟嘟
纯度和浓度都够，要么是公司问题。最好找个好点公司固定下来都在那测。
我倒是觉得应该用引物直接测，克隆测的是单个的不一定准，一般克隆都要测三个以上，如果样多的话工作量比较大。
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5楼2009-01-09 22:11:34
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
假阳性啊
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6楼2009-01-09 22:47:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by haifeng8882 at 2009/1/9, 15:44:
谢谢楼上，那我应该怎样才能顺利的做出结果 啊 ？
新手刚开始，还有许多需要学习！

P完之后连上T载体再测序会好很多
用Promega的T载体+试剂盒，效果很好
赞一下 回复此楼
7楼2009-01-09 22:49:11
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
haifeng8882(金币+1,VIP+0):谢谢大家的帮忙
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-9 22:49:


P完之后连上T载体再测序会好很多
用Promega的T载体+试剂盒，效果很好

用Promega的T载体+试剂盒，连接后转入大肠杆菌，经蓝白筛选后做菌落PCR，防止假阳性克隆，再挑选测序
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8楼2009-01-10 10:06:07
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