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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS蛋白电泳菜鸟上样量求助
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葱头0471

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS蛋白电泳菜鸟上样量求助 已有1人参与

我买的marker标品推荐一次上样量是5微升，我的样品和上样缓冲液是按照1:1混合的，那我的混合液是应该上10微升还是5微升呢
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1楼 2017-05-16 17:02:25
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马伟sxl

新虫 (初入文坛)
我是刚开始做WB相关的，我感觉如果你的点样孔可以上10微升，你可以上10微升啊，我一般Mark上样量比样品上样量少，但是我会在Mark中加点Loadingbuffer，使有Mark的加样孔量和样品的差不多就可以了，其实Mark就是为了方便判断自己的目的蛋白的位置，只要Mark能显示出来就OK了吧

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2楼2017-05-18 11:49:31
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F翔T

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Maker一般一次3-5微升就够了，只是为了判断目的蛋白位置而已。你的样品上样体积是根据你的蛋白总量来决定的，比如说你的上样量是30微克，那么除以你的蛋白浓度就是你的上样体积了，这里你要保证每个样的总蛋白是一样的，这样不同组的比较才是有意义的。一般的胶孔上样体积在30-50微升之间。
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3楼2017-05-18 22:25:16
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