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zstzhfnuli

新虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by liaohongjun at 2017-05-18 15:51:22
针对只有ng级的蛋白?你们纯化思路是什么?

ng级的难度不在纯化,而在检测对样品的需求量
纯化
11楼2017-06-05 16:24:19
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zstzhfnuli

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by duowan17 at 2017-05-26 15:04:00
大家好:
       有一大肠杆菌重组的蛋白,等电点5.0左右。用阴离子交换(DEAE、QFF)目的蛋白均流穿,PB或Tris缓冲液均如此,尝试过改变PH值及缓冲液浓度,效果不大,且流穿峰中杂蛋白也比较多。尝试疏水层析,20 ...

等单点只是一种表征参数,高于等电点可能带阴离子,但是这种阴离子对于层析是否是有效的阴离子与蛋白的空间结构也是密切相关的,所以高于等电点不一定就会带有效的层析负电荷,所以可以尝试一下阳离子,加入尿素等手段试试,纯化就是要多试试;如果流穿出的杂蛋白是目的蛋白的结构类似物,那么你的实验没问题,如果杂蛋白结构与你的目的蛋白结构差别比较大的话,就要审视一下你的实验是否有问题,比如树脂的处理是否有问题;
你可以尝试一下亲和层析,比如染料亲和层析;
关于沉淀,需要了解你的蛋白的性质才好分析;
纯化
12楼2017-06-05 16:32:10
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zstzhfnuli

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 幽阶一夜苔生 at 2017-05-19 09:47:59
你们都是纯化的分子蛋白之类的,试问虫友们有没有做过颗粒纯化的,比如说细菌芽孢,本人正在做这方面的工艺研究,问题不老少,有同方向的可以一起讨论下。。。。。

还真没做过这方面的研究,搬个凳子学习学习
纯化
13楼2017-06-05 16:33:46
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liaohongjun

铁虫 (小有名气)


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11楼: Originally posted by zstzhfnuli at 2017-06-05 16:24:19
ng级的难度不在纯化,而在检测对样品的需求量...

有道理,目前我有个项目,目标蛋白含量极低!没有一直找不到准确有效的含量测定方法,同时其他杂蛋白也会影响检测!

发自小木虫Android客户端
14楼2017-06-07 11:15:12
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18328239332

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的甘氨酸中含有15%左右的谷氨酰胺,这种情况有没有办法分离纯化出甘氨酸呢
15楼2018-03-16 09:47:14
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my900521

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有木有做过蛋白稳定性分析的小伙伴,或者是buffer条件筛选

发自小木虫IOS客户端
16楼2018-03-16 11:34:55
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ytp123

新虫 (小有名气)

17楼2018-03-20 22:06:25
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