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Catherine92金虫 (小有名气)
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[交流]
癌症突变，一个都跑不了——数字PCR
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一则故事：30年抗癌传奇 一位名为Carmen Teixidor的 女士，已经与乳腺癌战斗了 30 年。 期间，她接受过各种癌症治疗方法，看过了所有可能治好她癌症的医生。她做了乳房切除，进行了一次又一次的化疗和手术，然后经历一次又一次的复发。生活质量因此而大打折扣，她心中的恐惧也挥散不去。  癌症令人痛苦，但科学在酝酿希望。2013年，纽约斯隆-凯特琳癌症研究中心的医生分析了她的癌细胞组织，并测定了癌细胞的DNA序列，发现她的癌细胞的确产生了一些受到医学界关注的基因突变。  之后经过测试发现，她癌细胞中的一个基因突变与一种试验药物的目标能够匹配起来。抱着一线希望，Teixidor加入了临床试验，从2015年夏末开始服用癌症靶向药物。几周后，Teixidor的癌细胞就开始减少。  现在的Teixidor年逾70，还在与癌症继续战斗，但她身材苗条，扎着充满活力的马尾辫，并且投身于雕塑、壁画等艺术创作中。从这位在癌症面前一直不服输的“战士”身上，我们看到了癌症治疗的曙光。 一组数据 无独有偶，来看一组数据： 肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤疾病，在我国每年新发病的肺癌患者超过73万人，每年死于肺癌的患者超过60万人。EGFR靶向药物为中国肺癌患者提供了多种治疗选择，但耐药是肺癌靶向治疗中常见的难题，在中国的非小细胞肺癌患者中，约有30%-40%发生EGFR突变，而接受过EGFR-TKI药物治疗的EGFR突变患者中，约三分之二患者会由于T790M突变而产生耐药，导致疾病再次进展，患者亟需得到新的治疗方案。 思考 自从人类基因组项目开始，科学家们就一直梦想着，如何用精准的个人分子信息来指导疾病的诊断和治疗，即找到产生疾病的基因突变？然后就像打靶一样，用设计好的药物有目标地攻击突变？  突破 我们知道，数字PCR系统已经不是很陌生了。 自从2011年以来，数字PCR技术仅供研究使用。 与其他数字PCR技术不同，数字PCR是一种核酸分子绝对定量技术。 定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，如实时荧光定量PCR是基于Ct值（指可以检测到荧光值对应的循环数），因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究（如等位基因不平衡表达）、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。 而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量，消除定量PCR有时不“太”定量的尴尬。 20 世纪末，Vogelstein 等提出数字PCR( digitalPCR，dPCR) 的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至多包含一个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR 扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。  [数字PCR原理图] 应用 利用它具有一系列重要的基因组应用，包括： >>癌症生物标志物研究和拷贝数变异分析：以卓越的灵敏度和准确度测量癌症突变的变异程度、检测稀有的 DNA 靶拷贝以及解析拷贝数变异状态。 >>病原体检测：精确地对靶 DNA 或 RNA 分子中的细微变化进行定量分析，从而检测和监测病原体。 >>与新一代测序 无缝对接：无需使用标准曲线，直接对 NGS 库执行绝对定量分析。 >>基因表达分析：可对少量 mRNA 和 miRNA 的细微变化进行准确及重复性极佳的检测。 >>环境监测：可测试多种环境样品，例如土壤和水。 >>食品检测：可对转基因生物体 (GMO) 进行评估。 目前，数字PCR技术不断发展，Bio-Rad、Thermo Fisher等厂家相继推出技术较为成熟的数字PCR产品 |
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