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新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助帮忙看一下电泳图，谢谢

第1张图片为pcr产物电泳图

第2.3.4张图片为酶切后电泳图

PCR产物测浓度在500-1000ng/ul，电泳时有杂带产生，酶切时50微升体系，加pcr产物2ul，pcr循环设置：95℃ 5min，95℃ 30s ，51℃ 30s，72℃ 45s ，72℃ 10 min。35个循环，产物676bp。请前辈帮忙分析一下，具体问题出在哪一步？

限制性内切酶说明书要求65度，温育5-15min，我能用37℃ 吗？

我看别人做的没有用这么高的温度的？

求教，万分感谢！

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