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2017mwl

新虫 (小有名气)

[交流] PCR问题 已有6人参与

pCR扩增后我做了反应液回收 测了浓度70ng/ul左右 OD260/280是1.84 请问我的浓度是不是偏低 还有OD比值合适么？

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1楼 2017-05-06 16:38:49
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
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浓度略低，送测可能测不出来，最好有个200~300ng/ul，OD比值没毛病，DNA一般在1.8~2.0之间都可以
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2楼2017-05-07 11:15:16
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2017mwl

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 11:15:16
浓度略低，送测可能测不出来，最好有个200~300ng/ul，OD比值没毛病，DNA一般在1.8~2.0之间都可以

那我是不是没必要链接载体了 重新提

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3楼2017-05-07 12:11:29
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-05-07 12:11:29
那我是不是没必要链接载体了 重新提
...

其实你可以以这个为模板再扩一次，相当于富集了一下，条带量度基本跟mark差不多时就比较稳了，70的浓度根据我的经验在琼脂糖凝胶电泳上很暗。
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4楼2017-05-07 15:56:06
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2017mwl

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 15:56:06
其实你可以以这个为模板再扩一次，相当于富集了一下，条带量度基本跟mark差不多时就比较稳了，70的浓度根据我的经验在琼脂糖凝胶电泳上很暗。...

这已经是第二次了 第一张图是第一次跑的 上样5ul 第二张图是第二次PCR 上样2.5ul
PCR问题


PCR问题-1



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5楼2017-05-07 16:24:52
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 15:56:06
其实你可以以这个为模板再扩一次，相当于富集了一下，条带量度基本跟mark差不多时就比较稳了，70的浓度根据我的经验在琼脂糖凝胶电泳上很暗。...

我最后将反应液纯化回收了一下 测得浓度是70多 可能是吸附柱没洗脱干净

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6楼2017-05-07 16:28:05
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-05-07 16:24:52
这已经是第二次了 第一张图是第一次跑的 上样5ul 第二张图是第二次PCR 上样2.5ul


...

这个亮度不止70ng/ul吧
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7楼2017-05-07 16:27:57
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
客观的讲，这个亮度大概都有300+ng/ul了，送样是没问题的
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8楼2017-05-07 16:29:16
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 16:27:57
这个亮度不止70ng/ul吧...

所以我怀疑是洗脱的问题 部分挂在CB2柱子上了 没洗脱下来

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9楼2017-05-07 16:31:07
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-07 16:29:16
客观的讲，这个亮度大概都有300+ng/ul了，送样是没问题的

主要后边我又给纯化了 测得浓度巨低

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10楼2017-05-07 16:31:58
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