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合欢雨意

银虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR

各位好：
       我现在在提取RNA，请问做RT_PCR时进行cDNA的合成前必须要知道RNA的浓度吗？看到有人在做A260，A280，A230， 要求A260介于0.1和1.0，A260/A280介于1.8-2.0，A260/A230大于1.7。
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1楼 2017-05-04 16:51:52
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如烟2005

新虫 (初入文坛)
★ ★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-07 22:22:46
引用回帖:
1楼: Originally posted by 合欢雨意 at 2017-05-04 16:51:52
各位好：
       我现在在提取RNA，请问做RT_PCR时进行cDNA的合成前必须要知道RNA的浓度吗？看到有人在做A260，A280，A230， 要求A260介于0.1和1.0，A260/A280介于1.8-2.0，A260/A230大于1.7。

必须测RNA浓度，取不同处理样品相同量的RNA反转录为cDNA，以保证模板浓度比较接近，我是这样理解的有 希望有帮助。

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3楼2017-05-04 19:12:58
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普通回帖

合欢花的忧伤

新虫 (著名写手)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
那是测质量的，大哥

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2楼2017-05-04 17:28:19
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研海一鲸

银虫 (小有名气)
★ ★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-05 16:15:51
1.RT试剂盒有有效浓度范围规定，RT反应最高值为几千ng/微升不等，可参考说明书。
2.测量260/280等数值是方便参考RNA纯度，一般希望无DNA或蛋白污染，越纯越好。
3.增加测量步骤，可以统一最终cDNA浓度，做一个半定量检测。
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5楼2017-05-04 19:30:19
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yumao8510

木虫 (小有名气)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
定性的话可以不测

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9楼2017-05-07 14:43:35
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欢喵

新虫 (小有名气)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by 合欢雨意 at 2017-05-04 16:51:52
各位好：
       我现在在提取RNA，请问做RT_PCR时进行cDNA的合成前必须要知道RNA的浓度吗？看到有人在做A260，A280，A230， 要求A260介于0.1和1.0，A260/A280介于1.8-2.0，A260/A230大于1.7。

要测一下的，万一你的RNA就没提出来呢，或者提的质量差呢

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11楼2017-05-09 20:04:26
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bye1

新虫 (初入文坛)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
测啊，逆转录的模板量最好控制在试剂盒要求的范围内，也就几分钟的事

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15楼2017-11-15 11:10:29
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红嘴相思鸟

新虫 (初入文坛)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
需要测

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16楼2017-11-15 11:15:21
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拿下英语

金虫 (著名写手)
★
合欢雨意(金币+1): 谢谢参与
protocol有推荐浓度，用于反转录的rna一般为300ng

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18楼2018-05-30 19:28:02
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syhorchid4楼
2017-05-04 19:26   回复  
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tzynew6楼
2017-05-04 20:01   回复  
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slytjiaofei7楼
2017-05-04 20:21   回复  
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15861655328楼
2017-05-04 20:49   回复  
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纳米材料75310楼
2017-05-07 14:49   回复  
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gengxin6012楼
2017-05-09 20:39   回复  
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祝福
slytjiaofei13楼
2017-05-09 20:43   回复  
冬日曙光14楼
2017-05-09 20:48   回复  
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晨曦CXL17楼
2018-02-16 08:35   回复  
nijingxuan19楼
2018-08-16 21:27   回复  
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晨曦CXL20楼
2019-03-07 14:10   回复  
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